国产商清国产精品国产k_囯产亚州中文字幕日韩在线_国产福在线永久视频_欧美日有码视频√_天天躁夜夜躁狠狠久久kk_日韩中文字幕精品在线观看_毛片a级三毛片免费播放_亚州精品中文字幕乱码三区_国产在线电影一区_国产AV青青大帝

您好,歡迎光臨上海雅吉生物商城!
工作時間:9:00-18:00
全國服務(wù)熱線:021-34661276

細胞傳代步驟

發(fā)布時間:2020/8/27 15:31:25      閱讀次數(shù):2856

 

 細胞傳代步驟細胞有貼壁和懸浮細胞,還有懸貼混合的,一般貼壁和懸浮分開處理,具體傳代步驟如下:

細胞傳代如果未超過80%匯合度時,將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中,留5ml完全培養(yǎng)基,放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng);如果細胞密度80%,即可進行傳代培養(yǎng),傳代具體步驟如下細胞傳代:

 細胞傳代步驟A1、對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:

方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。

方法:可選擇半數(shù)換液方式,棄半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。

A2、懸浮細胞凍存:

1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,將T25 培養(yǎng)瓶中的懸液收集至離心管中1000rpm離心5min;

2、棄上清,沉淀細胞加入1ml/支的雅吉生物無血清凍存液(C7001),混勻后加入凍存管中。(如:凍一支,加入 1ml 無血清凍存液即可)

3、將凍存細胞直接放入-80℃冰箱即可;如后期要將細胞轉(zhuǎn)入液氮罐中,需在-80℃冰箱存

24 小時以上。

 細胞傳代步驟B1、對于貼壁細胞,傳代可參考如下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液約1-2ml至培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上完全培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細胞,使之完全脫落后吸出,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL完全培養(yǎng)重懸。

4. 將細胞懸液按1:2的比例進行分瓶傳代(兩個T25瓶),補充新的完全培養(yǎng)基至5-8ml/瓶最后放入到37℃、5%CO2的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

B2、貼壁細胞凍存:

1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,棄T25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細胞一次;

2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入5ml完全培養(yǎng)液終止消化,再輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心 5min;

3、 棄上清,沉淀細胞加入1ml的雅吉生物無血清凍存液(貨號:C7001),混勻后加入凍存管中。

 細胞傳代步驟

細胞復(fù)蘇:

1、從液氮中取出細胞凍存管(注意佩戴防護面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結(jié)晶,然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁;

2、將凍存管中的細胞移至含 5ml 完全培養(yǎng)基的15ml離心管中,1000rpm離心5min;

3、棄上清,沉淀用5ml完全培養(yǎng)基重懸,接種T25培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

第二天,換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

 細胞傳代步驟常見問題及解決方案:
1.培養(yǎng)瓶有破裂,培養(yǎng)液有漏液:細胞極大可能會污染,所以我們會及時安排幫老師解決。
2.細胞漂浮:培養(yǎng)瓶不開封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。1-2 小時后觀察,如細胞大部分又貼回瓶底,表明細胞活力正常,剩余漂浮的細胞可以去掉,留 8-10ml 培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察,細胞生長至匯合度 85-95%,進行消化傳代;如細胞還是不貼壁,將細胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶,原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),中間注意觀察,我 們的技術(shù)人員會一直跟蹤指導(dǎo),直到問題解決。


微信客服
掃一掃立即咨詢


微信客服
掃一掃立即咨詢

銷售電話:

021-34661275

021-34661276

15301693058