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細(xì)胞篩選方法和步驟

發(fā)布時(shí)間：2021/6/17 9:26:41 閱讀次數(shù)：733

篩選步驟：

       a.殺滅曲線的確定
       1.將未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞按每孔0.05million鋪入24孔板，孵育過(guò)夜，
       2.第二天，除去24孔板中舊的培養(yǎng)基，
       3.將含不同濃度嘌呤霉素（1ug/mL，2ug/mL，3ug/mL，4ug/mL，5 ug/mL，6ug/mL，7ug/mL）的新鮮培養(yǎng)基加入已鋪有細(xì)胞的24孔板，
       4.每2天更換新鮮的篩選培養(yǎng)基，
       5.每天觀察細(xì)胞的存活比例，

6.最小的嘌呤霉素使用濃度就是從嘌呤霉素篩選開(kāi)始1-4d內(nèi)殺死所有細(xì)胞的最低篩選濃度。

      b.嘌呤霉素篩選轉(zhuǎn)染細(xì)胞
      1.第一天，將轉(zhuǎn)染的細(xì)胞按每孔0.05million鋪入24孔板，孵育過(guò)夜
      2.第二天，除去24孔板中舊的培養(yǎng)基，
      3.加入含嘌呤霉素（2ug/mL）的篩選培養(yǎng)基，孵育，
      4.每2天更換新鮮的篩選培養(yǎng)基，
      5.每天觀察細(xì)胞的存活比例，
      6.在同一時(shí)間點(diǎn)（2d）存活的細(xì)胞，即為轉(zhuǎn)染成功細(xì)胞，
      7.對(duì)篩選后的細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增。