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雅吉質(zhì)粒擴(kuò)增說明書

發(fā)布時(shí)間：2021/7/29 11:21:55 閱讀次數(shù)：752

一、產(chǎn)品信息

產(chǎn)品形式	運(yùn)輸方式	保存溫度	保存期限
★質(zhì)粒干粉	常溫	-20度	90天
菌落平板	冰袋	4度	7天
穿刺菌	冰袋	4度	7天
甘油菌	冰袋	-80度	90天
液體質(zhì)粒	冰袋	-20度	90天

二、擴(kuò)增流程
收到產(chǎn)品后，請先根據(jù)產(chǎn)品管壁標(biāo)簽來判斷產(chǎn)品形式，并在擴(kuò)增前準(zhǔn)確查找該質(zhì)粒的抗性、感受態(tài)和培養(yǎng)溫度。
1、質(zhì)粒干粉（請務(wù)必轉(zhuǎn)化挑單克隆重提后使用）
  ①收到質(zhì)粒干粉后請先5000rpm離心1min，再加入20μl 無菌水溶解質(zhì)粒；
  ②取2μl質(zhì)粒加至100μl 感受態(tài)中，冰浴30min后，42℃熱激90s，再冰浴2min；
  ③加入900μl無抗的LB液體培養(yǎng)基，180rpm震蕩培養(yǎng)45min；
  ④6000rpm離心5min，僅留100ul上清混勻菌體沉淀，并全涂至對應(yīng)抗性LB平板上；
  ⑤將平板正向培養(yǎng)1h，再倒置培養(yǎng)14-16h。如果是30度培養(yǎng)則培養(yǎng)20h；
（如果第二天菌落過多，請將質(zhì)粒稀釋后再轉(zhuǎn)化。如果第二天無菌落，請加入10μl質(zhì)粒轉(zhuǎn)化）

  ⑥挑取單菌落至LB液體培養(yǎng)基中，加入抗生素，37℃震蕩培養(yǎng)14~16h，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要提取質(zhì)粒。
  2、甘油菌：四區(qū)劃線后挑單菌落培養(yǎng)，酵母菌需要先液體復(fù)蘇。
  3、穿刺菌：穿刺接種后四區(qū)劃線，挑單菌落培養(yǎng)。
  4、平板：直接挑單菌落液體培養(yǎng)。
  5、液體質(zhì)粒：單獨(dú)提取的液體質(zhì)粒收到后可直接使用。

三、轉(zhuǎn)化圖片