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發(fā)布時間:2021/12/8 9:35:26 閱讀次數(shù):727
1、VRBA培養(yǎng)相關(guān)問題
(1)所用器皿是否需要滅菌?
答:不需要。配制培養(yǎng)基所用到的錐形瓶、玻璃棒、勺子等均不需要滅菌,但要求一定要清洗干凈,表面無污漬、無殘留。煮沸完成后,取下錐形瓶,用一般常用的衛(wèi)生紙(軟紙)覆蓋瓶口,用橡皮筋纏繞,待冷卻至適宜溫度即可傾注培養(yǎng)基。在傾注培養(yǎng)基時,須點燃酒精燈,稍微灼燒錐形瓶口。
(2)如何保持“煮沸2min”?
答:可以用電磁爐或電熱板進行加熱煮沸,在該培養(yǎng)基即將煮沸時調(diào)低溫度。實際操作時,不需要嚴格按照此要求進行,加熱煮沸數(shù)秒即可。原因:本培養(yǎng)基很難保持煮沸2min,一旦煮沸,則培養(yǎng)基很快上涌、翻騰,若不調(diào)低溫度或立刻采取其他措施,則培養(yǎng)基可在數(shù)秒內(nèi)噴涌出來,嚴重者可噴涌2米以上、電磁爐周圍1—2米范圍內(nèi)都是培養(yǎng)基飛濺的范圍(實驗室危險因子之一)。
(3)若培養(yǎng)基未用完,是否可以冷藏起來下次用?
答:不可以。4789.28中已規(guī)定,固體培養(yǎng)基最多允許熔融1次(指的是經(jīng)過高壓滅菌冷卻后的培養(yǎng)基還可以熔融一次后使用)。且VRBA培養(yǎng)基冷卻后,再次熔融時非常容易噴涌,若溫度控制不當,底部培養(yǎng)基熔融后很快就會發(fā)生噴涌(即培養(yǎng)基未完全熔融就會發(fā)生噴涌現(xiàn)象)。
(4)傾注完成后是否需要“覆蓋一層”?如何覆蓋?
答:一般情況下不需要覆蓋。在實際操作過程中,若檢驗員初次接觸該食品(或食品品類),則有必要在傾注培養(yǎng)基后再覆蓋一層(原因是不清楚該樣品是否會發(fā)生蔓延)。而如此往復(fù)測試幾次后,若該樣品或食品品類均不存在蔓延現(xiàn)象,則以后的實驗中都不需要進行覆蓋。若重復(fù)多次測試后都有蔓延現(xiàn)象,則以后的檢驗中最好都進行覆蓋,最好是在原培養(yǎng)基已凝固或半凝固(不會發(fā)生晃動)時再傾注一層培養(yǎng)基(“一層”是指緩慢傾注培養(yǎng)基至培養(yǎng)基剛好能夠覆蓋整個平皿)。
2、如何確定培養(yǎng)基上長的是不是大腸菌群?
答:建議新手們認真按照標準進行證實試驗,此證實試驗簡單易操作,每一次VRBA上有菌落生長都進行證實試驗,如此往復(fù)3-4次,對于哪種形態(tài)才是大腸菌群已經(jīng)能夠了然于心。
3、兩個梯度都長了菌,如何選取?
答:選取15-150CFU之間的平板(指的是VRBA平板上所有菌落數(shù)在此范圍),挑取可疑菌落進行證實試驗。詳細舉例說明:若有兩個連續(xù)梯度的4個平板上菌落數(shù)均在15-150之間,則4個平板上的菌落都要挑取進行證實試驗,實際操作時,可靈活操作,如:1:10的兩個平板上的菌落數(shù)分別為120、123,1:100的兩個平板的菌落數(shù)分別為16、18,嚴格來講必須至少在每個平板上分別挑取5個可疑菌落、5個典型菌落進行證實試驗,如此需要40根GBLB肉湯管。建議使用鎳合金接種環(huán)(即傳統(tǒng)的接種環(huán),而不是一次性塑料接種環(huán)),因為VRBA上生長的菌落(無論典型或可疑)大部分長在底層、且菌落一般較大,被培養(yǎng)基覆蓋,傳統(tǒng)的接種環(huán)較細,用以刮去上層培養(yǎng)基較方便,挑取菌落也較方便。
4、如何進行證實試驗?菌落選取數(shù)量?
答:同上所述,建議新手們VRBA上的所有不同形態(tài)的菌落都進行證實試驗。每種不同形態(tài)都挑取5-10個進行證實試驗(若BGLB管足夠,建議多挑取幾個進行試驗)。
注意:A.每種可疑菌落挑取5個,每個菌落放入1管GBLB管中;B.“產(chǎn)氣者,記為大腸菌群陽性管”,就要求在實驗前須認真篩選BGLB管,凡產(chǎn)氣的GBLB管應(yīng)棄去不用。
5、結(jié)果如何計算?
答:首先,在VRBA培養(yǎng)24h后進行計數(shù),分別計數(shù)可疑大腸菌群和典型大腸菌群(何為可疑、何為典型?同“2”,檢驗員多進行幾次實驗后自然很清楚典型的大腸菌群是何種形態(tài))的數(shù)量。假如在1:10的平板上可疑大腸菌群有10個,典型大腸菌群有6個;其次,進行證實試驗,挑取上述可疑和典型大腸菌群各5個(或者全部挑。,假如10個可疑大腸菌群中有3個證實為陽性,6個典型大腸菌群中有5個證實為陽性,則計算方法如下:最終大腸菌群數(shù)=經(jīng)證實的大腸菌群數(shù)=可疑大腸菌群經(jīng)證實的數(shù)量+典型大腸菌群經(jīng)證實的數(shù)量=10×(6/10)×10+6×(5/6)×10=110。
6、若平板上很多菌落,最終證實全部為陰性,結(jié)果如何計算?
答:根據(jù)第3條,選取適宜菌落數(shù)的平板挑取菌落進行證實試驗,若證實全部為陰性,則需要再挑取更低稀釋度的平板上的菌落(建議可疑和典型菌落分別挑取10個)進行證實試驗,若第二次證實試驗均呈陰性,以<1乘以最低稀釋度進行計算,如:1:10的平板菌落數(shù)分別為120、123,1:100的平板上菌落數(shù)分別為16、18,首先挑取1:100的兩個平板上的菌落進行證實試驗,若全部為陰性,再挑取1:10的兩個平板上的菌落進行證實試驗,若1:10的平板上的菌落數(shù)證實為陰性,則最終計算過程為<1x10,最終結(jié)果為<10;若1:10的的平板上的菌落有陽性管,則按照第5條進行計算。
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