關(guān)于商城

商城指南

支付方式

配送方式

售后服務(wù)

pSilent-1質(zhì)粒的操作流程

發(fā)布時(shí)間：2021/12/8 10:47:26 閱讀次數(shù)：862

基本信息：
平臺(tái)編號(hào)：zl-041505
啟動(dòng)子:   TrpC
復(fù)制子:   pUC
終止子:   TRPC
質(zhì)粒分類:   絲狀真菌載體；RNAi基因沉默干擾質(zhì)粒
質(zhì)粒大小:   7056bp
原核抗性:   Amp
篩選標(biāo)記:   Hyg
克隆菌株:   DH5a
培養(yǎng)條件:   37度
表達(dá)宿主:   絲狀真菌
5'測(cè)序引物:   根據(jù)序列設(shè)計(jì)
3'測(cè)序引物:   根據(jù)序列設(shè)計(jì)

收到產(chǎn)品后，請(qǐng)先根據(jù)產(chǎn)品管壁標(biāo)簽來判斷產(chǎn)品形式，并在擴(kuò)增前準(zhǔn)確查找該質(zhì)粒菌株的抗性、感受態(tài)和培養(yǎng)溫度。質(zhì)粒干粉（常溫運(yùn)輸，存于-20度，90天保質(zhì)期，請(qǐng)務(wù)必轉(zhuǎn)化挑單克隆培養(yǎng)）（本步驟僅作示例，非該產(chǎn)品的實(shí)際步驟）。

1.收到質(zhì)粒干粉后請(qǐng)先5000rpm離心1min，再加入20μl ddH2O去離子水溶解質(zhì)粒；

2.取1支100ul感受態(tài)于冰上解凍10min，加入2ul質(zhì)粒，再冰浴30min后，42℃熱激60s，不要攪動(dòng)，再冰浴2min；

3.加入900μl無抗的LB液體培養(yǎng)基，180rpm震蕩37℃培養(yǎng)49min；

4.6000rpm離心5min，僅留100ul上清液重懸細(xì)菌沉淀，并涂布目標(biāo)質(zhì)�？剐缘腖B平板上；

5.將平板正向培養(yǎng)1h，再倒置37℃培養(yǎng)14h。如果要求是30度則培養(yǎng)20h；（如果菌落過多，請(qǐng)將質(zhì)粒稀釋后再轉(zhuǎn)化。如果無菌落，請(qǐng)加入10μl質(zhì)粒離心全涂轉(zhuǎn)化）；

6.挑取單菌落至LB液體培養(yǎng)基中，加入對(duì)應(yīng)抗生素，220rpm震蕩培養(yǎng)14h，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要和質(zhì)粒提取試劑盒說明書提取質(zhì)粒。