養(yǎng)過RAW 264.7細胞系的小伙伴，都容易為一個問題感到苦惱：它太容易分化了！到底怎樣才能養(yǎng)好它呢？RAW264.7細胞培養(yǎng)注意事項有哪些，今天我們就給大家分享一些心得。 
 
RAW264.7細胞培養(yǎng)之基礎(chǔ)篇
RAW264.7細胞培養(yǎng)的第一步，是要對它的基礎(chǔ)培養(yǎng)條件了如指掌，比如生長特性、細胞形態(tài)、所需的培養(yǎng)基，甚至培養(yǎng)環(huán)境、傳代比例等等，做到知己知彼，才能百戰(zhàn)百勝。
                               

▲產(chǎn)品詳情  細胞系:RAW 264.7  培養(yǎng)基:CM-0190



▲RAW264.7細胞生長圖片
 
RAW264.7細胞培養(yǎng)之進階篇1
除了基礎(chǔ)條件，其他外界因素也容易引起細胞的“小脾氣”，比如運輸路上的顛簸、傳代方法等等。針對幾種常見的問題，今天來一 一為大家解答。
 
問題1 ：收貨后，細胞不見了
總是會收到這類反饋：收到細胞，期待值滿滿地打開包裝準備細胞培養(yǎng)，但在顯微鏡下卻找不到細胞！這是因為RAW 264.7 細胞貼壁較松，快遞運輸路上受到顛簸，可能會脫落。脫落的細胞懸浮在培養(yǎng)基中不容易聚焦。這時候不用擔心，把細胞放進培養(yǎng)箱靜置兩個小時就可以看到了。如果靜置后看到的細胞仍偏少，請將瓶子里的培養(yǎng)基都轉(zhuǎn)移到離心管里，1200 rpm（約250g）離心3分鐘，即可看到沉淀的細胞。細胞全部脫落，慌亂之下可能會一個細胞都找不著。這個時候離心驗證是最好的方法。
 
問題2 ：收貨處理后，細胞不貼壁
將細胞離心收集，用新鮮的培養(yǎng)基重懸細胞放到新的細胞培養(yǎng)瓶里之后，可能會出現(xiàn)細胞成團漂浮、不貼壁的情況。這種情況下，把細胞離心收集，用1 mL培養(yǎng)基重懸，慢慢地，輕輕地吹打，直到細胞被吹成單細胞，就可以重新鋪板了。RAW 264.7脫落后傾向于抱團，抱團時細胞是活著的，但很難貼壁。記得一定要把聚成團的細胞吹散成單細胞，不然細胞很難重新貼壁。
 
RAW264.7細胞培養(yǎng)之進階篇2 
正確的傳代方法是RAW264.7細胞培養(yǎng)的關(guān)鍵，每一步操作都要細致入微，稍有不慎細胞就分化了。RAW264.7細胞不能用胰酶消化，許多實驗室用細胞刮傳代，這是一種非常經(jīng)典好用的方法。在RAW264.7細胞培養(yǎng)這十幾年里，摸索出一個更不錯的方法：吹打傳代。吹打傳代操作簡單，對細胞培養(yǎng)的新手們更友好，也能更好地控制細胞分化率。


傳代步驟：
1)     輕拍幾下培養(yǎng)皿
2)     用1ml的槍或者巴氏管把細胞吹下來（吹不下來的舍棄）
3)     細胞吹下來后轉(zhuǎn)移到15ml離心管
4)     1200rpm （約250g）離心3min
5)     去上清，用新鮮培養(yǎng)基重懸細胞
6)     按比例接種到新的培養(yǎng)皿中


傳代時機：
1)     當細胞密度較低的時候，可能不太好吹下來。
2)     當細胞密度達到80%~90%的時候，最容易吹下。



▲推薦的RAW264.7細胞傳代密度


RAW 264.7細胞培養(yǎng)之終結(jié)篇
講了那么多如何處理RAW264.7巨噬細胞分化的情況，那分化了的細胞到底是什么形態(tài)呢？
l  分化的細胞呈多角形，體積明顯增大，時常有較長的黑色觸角



▲分化的RAW 264.7細胞形態(tài)
RAW264.7細胞培養(yǎng)注意事項：
1.    我們發(fā)現(xiàn)，RAW264.7巨噬細胞三天不傳代更容易分化，很難吹下，每一次接種密度都要控制好；
2.    分化的細胞貼壁牢固，傳代的時候千萬不要強制性吹下這些細胞，只接種容易吹下的那些未分化細胞；
3.    吹打的力度一定要輕，切勿暴力吹打；細胞的貼壁性和培養(yǎng)器皿的材料也有關(guān)，有時RAW264.7細胞會出現(xiàn)太容易吹下的情況，連分化細胞都貼壁較松，此時更適宜用巴氏管吹打；
4.    培養(yǎng)時，無法保證100% 不分化，通過傳代可以將分化比例控制在一定范圍
5.    RAW264.7細胞分裂活躍，記得每天看一看，周末也要抽點時間關(guān)心一下它哦~
 
小知識
RAW 264.7細胞系的起源
加利福尼亞索爾克研究所的W. C. Raschke在雄性BAB/14小鼠腹腔注射A-MuLV（Abelson鼠科白血病病毒）誘發(fā)腫瘤的腹水中建立了RAW 264細胞系。他發(fā)現(xiàn)RAW 264可以胞飲中性紅并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖，并且能通過抗體依賴途徑分解綿羊紅血球與腫瘤靶細胞。RAW 264.7不分泌A-MuLV（但用Moloney MuLV 拯救后可以在上清檢測到病毒），對LPS非常敏感。該研究1978年發(fā)表在《CELL》雜志。 [2]