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收到的細(xì)胞脫落了？碎片多？黑點(diǎn)多？

發(fā)布時(shí)間：2022/3/4 8:35:35      閱讀次數(shù)：754

 科學(xué)研究中需要用到各種細(xì)胞系作為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ�，這些細(xì)胞系通常可以從各大細(xì)胞庫(kù)獲取。

而在收到細(xì)胞庫(kù)寄送來(lái)的常溫細(xì)胞時(shí)，常常會(huì)遇到一些問(wèn)題，比如細(xì)胞脫落、皺縮、有黑點(diǎn)。

這篇文章將幫助大家解決這些常見(jiàn)問(wèn)題。

 收貨時(shí)，細(xì)胞脫落

01

有些細(xì)胞本身貼壁不牢，很容易脫落（如293系列，TM3，TM4，Raw264.7，原代內(nèi)皮細(xì)胞，原代平滑肌細(xì)胞）。

另外，運(yùn)輸過(guò)程中受到碰撞或氣溫過(guò)低，也可能導(dǎo)致細(xì)胞脫落。

處理辦法

① 脫落的細(xì)胞進(jìn)行離心收集，并在離心管中消化。

② 仍然貼壁的細(xì)胞，按照常規(guī)方法加入胰酶或其他解離劑消化。

③ 再將消化好的脫落細(xì)胞和貼壁細(xì)胞混合，按比例接種到新的培養(yǎng)器皿中。

 收貨時(shí)，細(xì)胞皺縮

02

運(yùn)輸過(guò)程中，路途顛簸加上溫度不穩(wěn)定，常溫細(xì)胞會(huì)發(fā)生回縮。

處理辦法

放入培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)，若4小時(shí)后仍然沒(méi)有伸展，延長(zhǎng)靜置時(shí)間。注意，過(guò)夜靜置時(shí)，需倒出部分培養(yǎng)基，留5-10mL在瓶中，瓶蓋擰松透氣，保持氣體交換（L15培養(yǎng)體系除外）。

若有脫落細(xì)胞，需離心收集。

處理后第三天

（圖片由客戶提供，僅供學(xué)習(xí)參考）

收貨時(shí)，細(xì)胞黑點(diǎn)較多

03

當(dāng)受到運(yùn)輸環(huán)境影響時(shí)，細(xì)胞會(huì)發(fā)生應(yīng)激反應(yīng)，分泌活動(dòng)增加，導(dǎo)致分泌蛋白增多，呈黑色圓球狀，分布無(wú)規(guī)律。

同時(shí)，路途中凋亡的細(xì)胞碎裂后將產(chǎn)生細(xì)胞碎片，為黑色或透明色，呈不規(guī)則狀，分布無(wú)規(guī)律。

另外，有些細(xì)胞本身分泌活動(dòng)較強(qiáng)，培養(yǎng)時(shí)常伴隨黑點(diǎn)。

處理辦法

★貼壁細(xì)胞放培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)后，正常換液或傳代；

★懸浮細(xì)胞800~1000rpm（約160~200g） 低速離心3min去除碎片。通常培養(yǎng)數(shù)天后，細(xì)胞狀態(tài)會(huì)逐漸穩(wěn)定下來(lái)。


 

小貼士：遇到小黑點(diǎn)問(wèn)題時(shí)，首先要排除微生物污染，再按以上辦法解決哦~

細(xì)胞碎片/分泌物和微生物污染的區(qū)別


 

_

細(xì)胞碎片/分泌物

微生物污染

形態(tài)

大小不一的黑色圓點(diǎn)，或不規(guī)則形狀

圓球狀或桿狀，

形態(tài)非常規(guī)則

是否運(yùn)動(dòng)

原地震動(dòng)，布朗運(yùn)動(dòng)

或相對(duì)液體靜止

快速游動(dòng)，快速轉(zhuǎn)圈或

相對(duì)液體靜止

分布情況

視野中分布無(wú)規(guī)律

視野中分布均勻

增長(zhǎng)情況

無(wú)抗生素條件下

不增多或緩慢增多

無(wú)抗生素條件下

48-72小時(shí)內(nèi)爆發(fā)式增多

 


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