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K7M2-WT細(xì)胞的培養(yǎng)

發(fā)布時(shí)間：2022/9/1 9:34:11      閱讀次數(shù)：389

 K7M2-WT(小鼠骨肉瘤成骨細(xì)胞)在Balb/c小鼠中形成腫瘤，在超過(guò)90%的接種小鼠中自發(fā)轉(zhuǎn)移到肺部。K7M2-WT細(xì)胞抗原表達(dá)：Ⅷ因子、整合唾液酸蛋白(BSP)、二聚糖、飾膠蛋白聚糖、絨毛蛋白。此外，骨唾液酸蛋白、二聚糖、飾膠蛋白聚糖和骨調(diào)素的表達(dá)顯示K7M2-WT細(xì)胞骨家族細(xì)胞特性。

生長(zhǎng)培養(yǎng)基

DMEM＋10% FBS＋1% P/S

推薦傳代比例

1:3-1:4

推薦換液頻率

2~3次/周

倍增時(shí)間

~31小時(shí)

細(xì)胞形態(tài)

成骨細(xì)胞樣

生長(zhǎng)特性

貼壁細(xì)胞

凍存條件

55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)+40%FBS+5%DMSO

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃


細(xì)胞復(fù)蘇

01：將水浴鍋預(yù)熱至37℃，準(zhǔn)備好干凈的一次性手套，將細(xì)胞從液氮罐中取出，放入一次性手套中，迅速?zèng)]入水浴鍋，搖晃凍存管加速溶解，以一分鐘內(nèi)全部溶解為宜；

02：將解凍的細(xì)胞放入裝有新鮮培養(yǎng)基的離心管中，打開(kāi)蓋子前，用75%酒精擦拭凍存管外部；

03：1200rpm離心3分鐘左右，離心完畢后去掉上清；

04：取適量與細(xì)胞配套的完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接入到無(wú)菌容器中，補(bǔ)充一定量培養(yǎng)基，再放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

細(xì)胞凍存

01：配置凍存液。由于DMSO配置時(shí)會(huì)發(fā)熱，一定要等凍存液冷卻后再使用，避免灼傷細(xì)胞；

02：細(xì)胞消化好后用新鮮培養(yǎng)基終止，制成細(xì)胞懸液，1200rpm離心3分鐘左右，盡量吸盡上清；

03：加入配置好的凍存液，調(diào)節(jié)濃度至大約1×106個(gè)細(xì)胞/mL，分裝到細(xì)胞凍存管；

04：分裝好的凍存液轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80℃冰箱過(guò)夜；

05：從-80℃冰箱取出凍存管，并迅速轉(zhuǎn)移到液氮長(zhǎng)期保存。

細(xì)胞傳代

1：將培養(yǎng)基吸出丟棄，加入2mL PBS潤(rùn)洗；

2：吸出PBS丟棄，加入2mL胰酶潤(rùn)洗；

3：放入培養(yǎng)箱消化2-3分鐘，輕拍培養(yǎng)皿側(cè)壁，看到細(xì)胞脫壁且聚集的細(xì)胞團(tuán)松散開(kāi)后，加入2mL完全培養(yǎng)基終止消化；

4：將細(xì)胞輕柔吹打，使細(xì)胞混勻?yàn)閼腋∫海鶕?jù)需求進(jìn)行接種。

小貼士

細(xì)胞密度不能太低；潤(rùn)洗時(shí)要注意將所有細(xì)胞都浸潤(rùn)到。

圖1. K7M2-WT細(xì)胞正常生長(zhǎng)

培養(yǎng)注意事項(xiàng)

1：該細(xì)胞對(duì)外界刺激較為敏感，建議使用新鮮的DMEM高糖培養(yǎng)基，培養(yǎng)基出現(xiàn)發(fā)紫現(xiàn)象時(shí)不建議繼續(xù)使用，且及時(shí)更換新鮮培養(yǎng)基；

2：該細(xì)胞貼壁不牢，會(huì)有部分細(xì)胞懸浮。換液時(shí)勿用PBS進(jìn)行沖洗，懸浮細(xì)胞過(guò)多時(shí)可離心收集再放回原培養(yǎng)瓶；

3：該細(xì)胞傳代時(shí)請(qǐng)注意消化程度，請(qǐng)勿消化過(guò)度。

 


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