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發(fā)布時間:2023/12/27 11:55:38 閱讀次數(shù):313
一、細(xì)胞培養(yǎng)條件
二、細(xì)胞收到后處理
培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是運(yùn)輸細(xì)胞的最好辦法。收到細(xì)胞用75%酒精噴灑整個細(xì)胞瓶,消毒后放到超凈臺內(nèi)嚴(yán)格無菌操作,將細(xì)胞瓶放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)后再做處理。顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存(最好40x,100x,200x各一張),前三天照片是重要售后依據(jù),不提供照片默認(rèn)收到狀態(tài)良好。(傳代后建議一瓶用原瓶的完全培養(yǎng)基,另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基,以便進(jìn)行對比培養(yǎng),換液后擰松瓶蓋)
三、細(xì)胞培養(yǎng)步驟
細(xì)胞傳代:如果未超過80%匯合度時,將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中,留5ml完全培養(yǎng)基,放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng);如果細(xì)胞密度超80%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),傳代具體步驟如下細(xì)胞傳代:
a、對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
b、細(xì)胞凍存:
1、細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,將T25 培養(yǎng)瓶中的懸液收集至離心管中1000rpm
離心5min;
2、棄上清,沉淀細(xì)胞加入1ml/支的雅吉生物無血清凍存液(C7001),混勻后加入凍存管中。(如:凍一支,加入 1ml 無血清凍存液即可)
3、將凍存細(xì)胞直接放入-80℃冰箱即可;如后期要將細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮罐中,需在-80℃冰箱存
放 24 小時以上。
C、細(xì)胞復(fù)蘇:
1、從液氮中取出細(xì)胞凍存管(注意佩戴防護(hù)面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結(jié)晶,然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁;
2、將凍存管中的細(xì)胞移至含 5ml 完全培養(yǎng)基的15ml離心管中,1000rpm離心5min;
3、棄上清,沉淀用5ml完全培養(yǎng)基重懸,接種至T25培養(yǎng)瓶,放于37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4、第二天,換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
四、注意事項(xiàng):該細(xì)胞難養(yǎng),收到細(xì)胞可按以下方法操作:
半換液處理,豎著培養(yǎng)瓶在培養(yǎng)箱靜置1小時左右,輕輕吸掉3ml左右培養(yǎng)基,然后補(bǔ)給3ml的完全培養(yǎng)基,如果培養(yǎng)基變色慢,可直接加500ul左右FBS,傳代的時候可以直接補(bǔ)給5ml培養(yǎng)基,分兩個培養(yǎng)瓶培養(yǎng),一般這樣傳代3次左右可以離心傳代一次,去掉死細(xì)胞
五、售后服務(wù)告知書
1)細(xì)胞出現(xiàn)問題,可重發(fā)的情況有哪些?判定標(biāo)準(zhǔn)是什么?
1. 細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問題,細(xì)胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等,重發(fā);
2. 細(xì)胞污染問題,請?jiān)谑盏疆a(chǎn)品48小時內(nèi),給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,核實(shí)后重發(fā);
3. 常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置24小時后,干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后24小時后,絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,(需提供真實(shí)清晰的細(xì)胞狀態(tài)照片),重發(fā);
4. 干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后24小時后或常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置4小時候并且未開封,出現(xiàn)污染,重發(fā);
5. 細(xì)胞活性問題,請?jiān)谑盏疆a(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,核實(shí)后予重發(fā);
6. 細(xì)胞收到當(dāng)天以及第2,3天請拍照,3天未告知的,視為產(chǎn)品合格。4-7天內(nèi)出現(xiàn)問題有提供收到細(xì)胞前3天照片和細(xì)胞出現(xiàn)問題時照片以及細(xì)胞相關(guān)操作的詳細(xì)步驟的,并跟技術(shù)人員溝通的,由技術(shù)人員判定為我方責(zé)任的,重發(fā)。技術(shù)人員判定為雙方承擔(dān)責(zé)任的由雙方進(jìn)行協(xié)商處理或者按合同價的50%收費(fèi)重發(fā)。
二)細(xì)胞出現(xiàn)問題,不予以重發(fā)的情況有哪些?
1. 客戶造成細(xì)胞污染,不重發(fā);
2. 客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā);
3. 非本庫推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā);
4. 細(xì)胞狀態(tài)不好,未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的,不重發(fā);
5. 細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的,不重發(fā);
6. 細(xì)胞收到2天內(nèi),未告知,不重發(fā);
7. 視具體情況而定。
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