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發(fā)布時間：2024/3/20 9:18:01 閱讀次數(shù)：478
【產(chǎn)品名稱】
通用名稱： HPV 假病毒
【包裝規(guī)格】
15μl /30μl /50μl /100μl/管
【預期用途】
用于體外檢測血清、單抗等樣品的 HPV 中和抗體滴度。
【檢驗原理】
中和抗體能在體外與 HPV 假病毒中和，使得部分假病毒喪失感染細胞的能力，進入細胞的假 病毒會表達 eGFP、RFP 和 E2-Crimson 等熒光報告基因蛋白。通過酶聯(lián)免疫斑點分析儀讀取并計算 每孔的熒光斑點數(shù)， 將待測樣品孔的熒光斑點數(shù)與假病毒對照組的熒光斑點數(shù)進行比較， 可計算待
測樣品孔的抑制病毒百分比。
通過計算公式可以計算出當 50%假病毒被抑制時待測樣品的稀釋倍數(shù)，即 ID50（Inhibition dilution），用 ID50 來表示待測樣品對假病毒的中和活性。 ID50 值越大，抗體中和活性越高。若樣品
有具體濃度，可計算 50%假病毒被抑制時待測樣品的濃度，即 EC50 ，EC50=樣品濃度/ ID50。
【主要組成成分】
HPV 假病毒顆粒， L1 、L2 蛋白，報告基因
【儲存條件及有效期】
-80℃ 密封貯存。有效期： 12 個月。
避免反復凍融。
生產(chǎn)日期及有效期詳見標簽。
【操作要求】
該產(chǎn)品為 HPV 假病毒，中和實驗操作需在生物安全柜中進行。
【檢測儀器要求】
若進行中和抗體檢測實驗， 需采用可進行熒光斑點計數(shù)的儀器， 如 Cellular Technology Limited
（CTL）-酶聯(lián)免疫斑點分析儀等。
熒光顯微鏡： 僅能觀察到綠色熒光蛋白 eGFP 及紅色熒光蛋白 RFP，且不可計數(shù)， 不推薦使用。
【必需實驗材料要求】
細胞： HEK 293FT 細胞，無其他推薦的替代細胞。若采用其他細胞，客戶需自行進行方法學
的建立及驗證。
HPV假病毒中和抗體實驗說明書
【使用方法】
1. 提前預鋪細胞： 提前 2-6 小時將 HEK 293FT 細胞消化， 以一定數(shù)量（建議細胞數(shù)： 1.5×104/孔）
加入 96 孔透明平底無菌細胞培養(yǎng)板中。
2. 待測樣品系列稀釋：在 96 孔無菌細胞培養(yǎng)板中，將待測樣品進行系列稀釋。 具體板子布局參
見圖 1。
3. 病毒稀釋： 本產(chǎn)品為假病毒母液， 客戶依據(jù)報告中假病毒的滴度進行稀釋使用（1TCID50=1 熒
光斑點）。
4. 待測樣品與病毒混合孵育： 將系列稀釋后的待測樣品與稀釋后的假病毒溶液混合（推薦體積比
1:1），4℃~8℃條件下孵育 1 小時。
5. 孵育結束后，將上述混合液與提前預鋪的細胞進行混合。
6. 將細胞培養(yǎng)板置于 37℃、5% CO2 的細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng) 60 ~96 小時。
7. 使用 ELISPOT 酶聯(lián)免疫斑點分析儀進行檢測，計算感染抑制率（%）。
感染抑制率（%）=1-（樣本檢測值-細胞對照值） /（病毒對照值-細胞對照值） ×100%。
8. 客戶根據(jù)自定標準進行 ID50 計算（推薦使用 Reed-Muench 法）。
【實驗設計注意事項】
1. 中和實驗過程中必須設置細胞對照和病毒對照（見圖 1）。
2. 中和實驗過程中需要設置陰性內控品及陽性內控品（客戶自備）來判斷實驗是否成立。
【產(chǎn)品性能指標】
外觀應滿足如下要求：包裝完整，無破損，文字符號標識清晰。
【產(chǎn)品使用注意事項】
1. 本產(chǎn)品僅供中和抗體體外檢測使用。
2. 因細胞水平的中和抗體檢測受細胞類型、細胞培養(yǎng)狀態(tài)、環(huán)境條件等影響較大，客戶需根據(jù)自
身實驗室條件確定細胞量、病毒加入量等中和實驗參數(shù)。
3. 本產(chǎn)品報告僅提供假病毒滴度。
4. 減少反復凍融，少量使用時建議分裝儲存。
5. 流水或 4℃融化使用。
6. 無菌操作。
7. 本產(chǎn)品不能擴增傳代。
8. 本產(chǎn)品無致病性，不會造成細胞病變及病理改變。
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