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玉米赤霉烯酮檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

發(fā)布時(shí)間:2024/9/2 9:00:14      閱讀次數(shù):142

 玉米赤霉烯酮檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

(酶聯(lián)免疫法)

 

 1 原理及用途

本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法檢測(cè)谷物、飼料等樣本中的玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)(又稱(chēng)F-2 毒素),試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、辣根酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測(cè)時(shí),加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本溶液,樣本中的玉米赤霉烯酮和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗玉米赤霉烯酮抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含玉米赤霉烯酮含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中玉米赤霉烯酮的殘留量。

2 技術(shù)指標(biāo)

2.1 試劑盒靈敏度:0.3ppb(ng/ml)

2.2 反應(yīng)模式:25℃,30min15min

2.3 檢測(cè)下限:

谷物及其食品原料…………………6ppb

飼料及飼料原料……………………18ppb

玉米皮、麥麩等吸水性強(qiáng)的樣本…18ppb

2.4 交叉反應(yīng)率:

玉米赤霉烯酮……………………100%

玉米赤霉酮………………………13%

玉米赤霉醇………………………<1%

 2.5 樣本回收率:

谷物及其食品原料…………………90%±15%

飼料及飼料原料……………………80%±15%

玉米皮、麥麩等吸水性強(qiáng)的樣本…80%±15%

3 試劑盒組成

酶標(biāo)板……………………………96孔

標(biāo)準(zhǔn)液(黑蓋):各1ml

0ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb、24.3ppb

酶標(biāo)記物(紅蓋)…………………5.5ml

抗體工作液(藍(lán)蓋)………………5.5ml

底物液A(白蓋)……………………6ml

底物液B(黑蓋)……………………6ml

終止液(黃蓋)………………………6ml

20×濃縮洗滌液(白蓋)……………40ml

說(shuō)明書(shū)…………………………………1份

蓋板膜…………………………………1張

自封袋…………………………………1個(gè)

4 需要的器材和試劑

4.1 儀器:酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器、振蕩器、離心機(jī)、恒溫培養(yǎng)箱、天平(感量0.01g)

4.2 微量移液器:?jiǎn)蔚?0µl-200µl、100µl-1000µl,多道300µl

4.3 試劑:甲醇

5 樣本前處理

5.1 樣本處理前須知:

實(shí)驗(yàn)器具必須潔凈并使用一次性吸頭,以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

5.2 配液:

配液1:樣本提取液

90%甲醇,即V甲醇:V去離子水=9:1。

配液2:工作洗滌液

20×濃縮洗滌液20倍稀釋(1份20×濃縮洗滌液加19份去離子水)。

5.3 樣本前處理步驟:

5.3.1 谷物(大米、玉米、小米等低脂含量)及其食品原料

1)稱(chēng)2g±0.05g粉碎樣本于50ml離心管中,加入8ml樣本提取液(配液1),振蕩5min,室溫4000r/min離心10min;

2)取0.5ml上清,加入2ml去離子水,混勻;

3)取50µl進(jìn)行分析。

稀釋倍數(shù):20    檢測(cè)下限:6ppb

5.3.2飼料及飼料原料

1)稱(chēng)2g±0.05g粉碎樣本于50ml離心管中,加入8ml樣本提取液(配液1),振蕩5min,室溫4000r/min離心10min;

2)取0.5ml上清,加入1ml樣本提取液(配液1),混勻;

3)取0.5ml混勻液體,加入2ml去離子水,混勻;

4)取50µl進(jìn)行分析。

    稀釋倍數(shù):60    檢測(cè)下限:18ppb

5.3.3 玉米皮、麥麩等吸水性強(qiáng)的樣本 

1)稱(chēng)2g±0.05g粉碎樣本于50ml離心管中,加入24ml樣本提取液(配液1),振蕩5min,室溫4000r/min離心10min;

2)取0.5ml上清,加入2ml去離子水,混勻;

3)取50µl進(jìn)行分析。

樣本稀釋倍數(shù):60    檢測(cè)下限:18ppb

6 酶聯(lián)免疫試驗(yàn)步驟

    將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出,置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時(shí)可能會(huì)有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解,每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架,將不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃。

6.1    號(hào):將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。

6.2 加樣反應(yīng):加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50µl/孔到各自的微孔中,然后加酶標(biāo)記物50µl/孔,再加入50µl/孔的抗體工作液,用蓋板膜封板,輕輕振蕩5秒混勻,25℃反應(yīng)30min。

6.3    滌:小心揭開(kāi)蓋板膜,甩去孔內(nèi)液體,每孔加350µl工作洗滌液,靜置30秒后棄去,重復(fù)洗滌5次,最后一次拍干(用吸水紙拍干,拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。

6.4    色:每孔加入底物液A 50µl,再加底物液B 50µl,輕輕振蕩5秒混勻,25℃避光顯色15min若藍(lán)色過(guò)淺,可適當(dāng)延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間

6.5     止:每孔加入終止液50µl,輕輕振蕩混勻,終止反應(yīng)。

6.6 測(cè)吸光值:用酶標(biāo)儀于450nm處測(cè)定每孔吸光度值(建議用雙波長(zhǎng)450/630nm)。測(cè)定應(yīng)在終止反應(yīng)后10min內(nèi)完成。

7 結(jié)果分析

7.1 百分吸光率的計(jì)算

標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光度值的平均值(雙孔)除以第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)液(0ppb)的吸光度值,再乘以100%,即

 百分吸光度值(%)=

A

×100%

A0

A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值

A0—0ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

7.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算

    以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo),對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度(ppb)的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對(duì)數(shù)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測(cè)物的實(shí)際濃度。

    若利用試劑盒專(zhuān)業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。(歡迎來(lái)電索。

8 注意事項(xiàng)

8.1 室溫低于25℃或試劑及樣本沒(méi)有回到室溫(25℃)會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。

8.2 在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會(huì)出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。

8.3 混合要均勻,洗板要徹底,在ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性。

8.4 在所有孵育過(guò)程中,用蓋板膜封住微孔板,避免光線照射。

8.5 不要使用過(guò)了有效期的試劑盒,不要交換使用不同批號(hào)試劑盒中的試劑。

8.6 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個(gè)單位(A450nm< 0.5 )時(shí),表示試劑可能變質(zhì)。

8.7 反應(yīng)終止液有腐蝕性,避免接觸皮膚。

 

9 貯藏及保存期

儲(chǔ)藏條件:試劑盒于2-8℃保存,避免冷凍。

質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見(jiàn)包裝盒。

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