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發(fā)布時(shí)間：2024/9/19 9:17:26 閱讀次數(shù)：156
J774A.1，中文名小鼠單核巨噬細(xì)胞，在貼壁細(xì)胞中屬于難消化的細(xì)胞類型，是新手小伙伴最頭痛的細(xì)胞之一。其最大的難點(diǎn)就是難消化，一般細(xì)胞用胰酶消化1-2分鐘就消化下來了，再長的半個(gè)小時(shí)都行了，可這細(xì)胞消化到1ml 0.25%胰酶消化液用沒了還沒消化下來。
今天小編請(qǐng)教了幾位技術(shù)老師為大家?guī)鞪774A.1的細(xì)胞消化教學(xué)步驟。
使用細(xì)胞刮刀刮下來
準(zhǔn)備材料消毒過的未拆封細(xì)胞刮刀一支、超凈臺(tái)、消毒過的未拆封離心管、消毒過的未拆封移液管(5-10ML)、消毒過的移液槍
操作步驟
1超凈臺(tái)提前打開消毒30分鐘，操作人員全身消毒進(jìn)行無菌規(guī)范步驟；
2從培養(yǎng)箱中取出裝有J774A.1的T25培養(yǎng)瓶和消毒過的未拆封細(xì)胞刮刀一起放置在超凈臺(tái)上，其他物品保持未拆封放置在超凈臺(tái)順手位置（注意：培養(yǎng)瓶豎起放置且瓶蓋不要提前旋開，防止污染。）；
3拆開細(xì)胞刮刀后，將刮刀單手舉起（勿碰到桌面）；另一只手單手旋開培養(yǎng)瓶蓋，瓶蓋內(nèi)面朝上放置；
4將細(xì)胞刮刀伸入瓶內(nèi)，通過瓶內(nèi)無細(xì)胞面調(diào)整刮刀刀頭方向，由外朝內(nèi)刮動(dòng)。
5使用完成后，直接丟棄細(xì)胞刮刀（無須將細(xì)胞刮刀放入瓶內(nèi)培養(yǎng)基內(nèi)攪動(dòng)，防止細(xì)胞受到刺激），使用移液槍吸取瓶內(nèi)培養(yǎng)基輕柔地吹下瓶壁，將細(xì)胞與培養(yǎng)基混合，反復(fù)2-3次；6使用移液槍將細(xì)胞與培養(yǎng)基的混合溶液移入離心管，之后使用離心機(jī)進(jìn)行離心，之后步驟可參照正常傳代或凍存步驟操作。
使用胰酶長時(shí)間消化一般該步驟是技術(shù)部不建議使用的，一是長時(shí)間消化會(huì)對(duì)細(xì)胞造成傷害，二是J774A.1屬于巨噬細(xì)胞，胰酶對(duì)其的刺激會(huì)導(dǎo)致其分化變得越來越難消化。若實(shí)驗(yàn)室設(shè)備暫無細(xì)胞刮刀且該細(xì)胞急于傳代可使用此方法進(jìn)行應(yīng)急操作。
準(zhǔn)備材料細(xì)胞培養(yǎng)箱、含10%FBS的完全培養(yǎng)基、0.25%胰酶消化液(新)、超凈臺(tái)、消毒過的未拆封離心管、消毒過的未拆封移液管(5-10ML)、消毒過的移液槍、消毒過的未拆封滴管(5ML)
操作步驟
1超凈臺(tái)提前打開消毒30分鐘，將0.25%胰酶消化液放置至常溫，操作人員全身消毒進(jìn)行無菌規(guī)范步驟；
2從培養(yǎng)箱中取出裝有J774A.1的T25培養(yǎng)瓶和胰酶消化液一起放置在超凈臺(tái)上，其他物品保持未拆封放置在超凈臺(tái)順手位置（注意：培養(yǎng)瓶豎起放置且瓶蓋都不要提前旋開，防止污染。）；
3拆開移液管裝在移液槍上并單手舉起（勿碰到桌面），另一只手單手旋開培養(yǎng)瓶蓋，瓶蓋內(nèi)面朝上放置，將瓶內(nèi)培養(yǎng)基吸走倒入廢液桶，并丟棄移液管，將移液槍放回原處；
4拆開5ML滴管并單手旋開消胰酶消化液瓶蓋，瓶蓋內(nèi)面朝上放置，吸取1ML胰酶消化液后蓋上胰酶消化液瓶蓋，將胰酶消化液放入裝有J774A.1的T25培養(yǎng)瓶內(nèi)蓋上瓶蓋并丟棄滴管，將胰酶消化液放回原處；
5將裝有J774A.1的T25培養(yǎng)瓶放入37℃，5%CO2，95%AIR的培養(yǎng)箱靜置30min，之后取出后棄掉使用的胰酶后再次重復(fù)上一步操作；
6以此步驟消化滿1h后，使用移液槍將培養(yǎng)瓶內(nèi)的胰酶移入廢液桶，換一根新的移液管后移入5ML含10%FBS的完全培養(yǎng)基終止消化，使用移液槍吸取瓶內(nèi)培養(yǎng)基輕柔地吹下瓶壁，將細(xì)胞與培養(yǎng)基混合，反復(fù)2-3次。使用移液槍將細(xì)胞與培養(yǎng)基的混合溶液移入離心管，之后使用離心機(jī)進(jìn)行離心，之后步驟可參照正常傳代或凍存步驟操作。
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