1.血清解凍
建議將血清從冰箱先移至2-8℃冰箱解凍，不宜在較高溫度下進(jìn)行解凍，解凍溫度較高會導(dǎo)致血清渾濁、沉淀增加、品質(zhì)下降等問題。解凍過程中需要輕輕搖晃混合，嚴(yán)禁將血清直接放在37℃長時時間孵育解凍。
如您是儲存在-80℃的血清，需提前幾天轉(zhuǎn)移至-20℃冰箱中(至少24小時)，使用前轉(zhuǎn)移至4℃冰箱中緩慢融化，融化過程中需不定期多次緩慢輕柔搖動瓶身使血清混勻，搖晃過程中避免劇烈搖晃產(chǎn)生泡沫。
2.血清濃度
原則上血清添加量不要太多，通常分為5%、10%、20%幾檔，部分細(xì)胞原代提取時會使用20%血清，大部分細(xì)胞正常培養(yǎng)時會使用10%的血清濃度。至于某一株細(xì)胞適應(yīng)什么樣的血清濃度，還需要根據(jù)細(xì)胞特性、實驗?zāi)康淖鰷y試和調(diào)校。
3.血清熱滅活
血清熱滅活是為了去除補體，補體是免疫系統(tǒng)的一部分，在體內(nèi)可通過多條途徑被激活，從而發(fā)揮調(diào)理吞噬裂解細(xì)胞、介導(dǎo)炎癥、免疫調(diào)節(jié)和清除免疫復(fù)合物等多種作用。如果不涉及以上實驗，可以不進(jìn)行血清熱滅活。
4.血清試用：
血清開始進(jìn)行試用時，如果是重新復(fù)蘇細(xì)胞，建議用原培養(yǎng)體系進(jìn)行細(xì)胞復(fù)蘇，待細(xì)胞狀態(tài)進(jìn)入最優(yōu)狀態(tài)后再進(jìn)行測試。測試時不建議直接100%直接換成新血清體系進(jìn)行培養(yǎng)，而應(yīng)該按照比例進(jìn)行梯度替換(例如，首次換液按照新舊體系1:3，第二次換液1:1，第三次換液3:1，而后完全替換。對于一些對培養(yǎng)體系比較敏感的細(xì)胞，可以進(jìn)一步優(yōu)化替換比例。)通過這種方法可以避免細(xì)胞因環(huán)境改變而出現(xiàn)應(yīng)激或者異常造成不必要的損失。
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