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食 用 淀 粉 植 物 源 性 成 分 探 針 法 熒 光 定 量 PCR 試 劑 盒

發(fā)布時(shí)間:2024/11/6 9:40:47      閱讀次數(shù):204

 產(chǎn)品及特點(diǎn)

本試劑盒可用于檢測(cè)食品或其他材料中是否有食用淀粉植物源性成分,F(xiàn)代食品加 工工藝極大改變了食材原有的味道、氣味、色澤、紋理和質(zhì)地等特性,因此傳統(tǒng)的感官 鑒別技術(shù)已經(jīng)無法對(duì)食材的真?zhèn)芜M(jìn)行準(zhǔn)確的鑒定。同時(shí)部分食材還有致敏性,因此基于 基因檢測(cè)的快速靈敏的食材來源檢測(cè)技術(shù)將對(duì)食品監(jiān)管和安全提供重要的保障。本產(chǎn)品 是根據(jù)探針法熒光定量 PCR 原理開發(fā)的食用淀粉植物源性成分檢測(cè)試劑盒,它具有下列 特點(diǎn):

1.   即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板。

2.   引物等組分經(jīng)過優(yōu)化,靈敏度高。

3.   提供陽性對(duì)照,便于區(qū)分假陰性樣品。

4.   特異性高,引物是根據(jù)食用淀粉植物源性成分 DNA 列高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不會(huì) 跟其他生物樣本的 DNA 發(fā)生交叉反應(yīng)。

5.   既可用于定性檢測(cè),又可用于定量檢測(cè)。用于定量檢測(cè)時(shí)線性范圍至少為5 個(gè)數(shù) 量級(jí)。

6.   本產(chǎn)品足夠 50  20μL 體系的探針法熒光定量 PCR 反應(yīng)。

7.   本產(chǎn)品只能用于科研。

 


成分規(guī)格

 

產(chǎn)品組成

編號(hào)

規(guī)格

2 × Probe qPCR Mix

GZ020701

550 μL

DEPC-H2O

GZ070401

1 mL

熒光模板稀釋液

GZ070407

1 mL

食用淀粉植物源性成分 qPCR 引物- 針混合液

 

GZ01518426yp

 

260 μL

食用淀粉植物源性成分 qPCR 陽性對(duì)

(1×10E8  拷貝/μL)

 

GZ01518426pc

 

50 μL

 

 

保存條件

低溫運(yùn)輸,-20保存,保存期限為一年。陽性對(duì)照需要單獨(dú)放置,不要污染其他試劑。

使用方法

一、DNA 提取(樣本制備區(qū))

1.  (選做)如果有 N 個(gè)樣品待提取,最好設(shè)置 N+2 個(gè)提取,多出的是 PC(樣品制 備陽性對(duì)照)和 NC(樣品制備陰性對(duì)照)?梢匀£栃詫(duì)照的 1000 倍稀釋液 10μL 再加 上一定量的水,使總體積與待提取樣品的規(guī)定體積一致,以此作為 PC 。另外用水作為  NC。

2.  用自選方法提取純化樣品 DNA ,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容。

二、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(樣本制備區(qū))

(由于陽性對(duì)照濃度高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,避免污染樣 品或本試劑盒的其他成分)。

1.    標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7 ,6 ,5 ,4 ,3 ,2

2.    用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光模板稀釋液,(最好用帶芯槍頭,下同)。

3.     7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL  的陽性對(duì)照(試劑盒提供) ,充分震蕩 1 分鐘,  1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

4.    換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL  的陽性對(duì)照(上步稀釋所得) ,充分震  1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

5.    換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL  的陽性對(duì)照(上步稀釋所得) ,充分震  1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

6.    重復(fù)上面的操作直到得到6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。 若無需制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,將陽性對(duì)照稀釋到 1×10E5 拷貝/μL 即可。

三、試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))

若有 N 個(gè)待檢樣品,準(zhǔn)備 N+2 個(gè) qPCR (N 個(gè)待檢樣品+1 個(gè)陰性對(duì)照+6 個(gè)陽性對(duì) ) ,向各 qPCR 管中分別加入下列成分。

 

成分

N 個(gè)

待檢樣品管

qPCR    陰性對(duì)照

qPCR    陽性對(duì)照

2 × Probe qPCR Mix

 10 μL

10 μL

10 μL

食用淀粉植物源性成分 qPCR 引物- 探針混合液

 5 μL

5 μL

5 μL

轉(zhuǎn)移至樣本準(zhǔn)備區(qū)。

四、添加模板(模板添加區(qū))

 qPCR 管中分別加入 5 ul 模板,順序?yàn)殛幮詫?duì)照(DEPC-H2O)、待測(cè)樣品模板、 食用淀粉植物源性成分 qPCR 陽性對(duì)照,離心 30 秒,立即進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。

五、擴(kuò)增反應(yīng)(擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū))

 qPCR 管放置在 qPCR 擴(kuò)增儀器樣品槽相應(yīng)位置,進(jìn)行擴(kuò)增,擴(kuò)增程序如下:

 

過程

溫度

時(shí)間

預(yù)變性

95

3 min

qPCR 反應(yīng)  45 個(gè)循環(huán))

95

15 sec

60

20 sec

信號(hào)通道

FAM 通道采集熒光信號(hào)

六、結(jié)果分析

1.  如果制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,則以陽性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct值為縱軸,繪制標(biāo) 準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品的 Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 DNA 濃度的 log 值,推算出其濃 度。

2.  如果未制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,按照如下標(biāo)準(zhǔn)判定結(jié)果:

陽性對(duì)照(1×10E5 拷貝/μL)結(jié)果:Ct <30,有明顯指數(shù)增長(zhǎng),呈典型的 S 型曲線。 陰性對(duì)照結(jié)果:Ct >40 或無 Ct值,無明顯指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。

樣本檢測(cè)結(jié)果:Ct <38,有明顯指數(shù)增長(zhǎng),表明樣本中檢測(cè)出食用淀粉植物源性成 分,結(jié)果為陽性;Ct >40 或無 Ct值,表明樣本中未檢測(cè)出食用淀粉植物源性成分,結(jié) 果為陰性;Ct 值在 38-40 范圍,應(yīng)對(duì)樣本進(jìn)行復(fù)檢,如重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果 Ct值仍在 38-40 圍,有明顯指數(shù)增長(zhǎng),則判定為陽性,否則為陰性。


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