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發(fā)布時間:2024/11/29 9:49:51 閱讀次數(shù):93
EOL-1人急性髓系白血病細(xì)胞培養(yǎng)說明書
培養(yǎng)條件 | 空氣,95%;CO2,5% ;37℃ | ||
生長特性 | 懸浮,圓形 | 凍存條件 | 無血清凍存液 |
培養(yǎng)體系 | 1640+10%特級胎牛血清(gibco)+1%P/S | ||
傳代方法 | 建議1:2傳代 | 傳代情況 | 2~3天換液/傳代 |
備注 | 懸浮細(xì)胞我司一般離心管發(fā)貨,方便離心收集細(xì)胞,收貨后離心收集細(xì)胞至T25瓶,可按方法B豎瓶培養(yǎng)傳代。 |
一、細(xì)胞培養(yǎng)條件
二、細(xì)胞收貨后處理
A、復(fù)蘇細(xì)胞處理方法:培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是運(yùn)輸細(xì)胞的最好辦法。收到細(xì)胞用75%酒精噴灑整個細(xì)胞瓶,嚴(yán)格無菌后將細(xì)胞瓶放置培養(yǎng)箱中靜置2-4小時以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。靜置后顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存(最好40x,100x,200x各一張),前三天照片是重要售后依據(jù),不提供照片默認(rèn)收到狀態(tài)良好。
B、凍存細(xì)胞處理方法:收到細(xì)胞后,觀察泡沫箱中干冰是否有剩余,凍存管是否完好無損是否有解凍情況,若發(fā)現(xiàn)干冰完全汽化或凍存管有解凍破損現(xiàn)象,請及時拍照并與我們聯(lián)系。如果細(xì)胞簽收三天內(nèi)未與我們聯(lián)系,則默認(rèn)為收貨良好。復(fù)蘇第一管如有活性問題,請及時聯(lián)系我們,技術(shù)人員與您溝通指導(dǎo)后再復(fù)蘇第二管,未與我方聯(lián)系擅自復(fù)蘇第二管出現(xiàn)問題不予售后。
三、細(xì)胞培養(yǎng)步驟
細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度超80%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),具體步驟如下:
方法A、
1) 離心收集細(xì)胞,1000 rpm條件下離心5-8min,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL培養(yǎng)液后吹勻;
2) 將細(xì)胞懸液按 1:2 的比例分到新的含 5-6 mL 完全培養(yǎng)基的T25培養(yǎng)瓶中或6cm培養(yǎng)皿中。(即1個T25瓶傳代接種至2個T25瓶或者2個6cm的培養(yǎng)皿)
方法B、對于較難培養(yǎng)的細(xì)胞或新手,可離心收集細(xì)胞至T25瓶,按以下方法培養(yǎng):
豎瓶子培養(yǎng),完培只需要3-4ml培養(yǎng),過48小時之后看狀態(tài),細(xì)胞密度沒有起來的話,再往瓶子補(bǔ)加1ml的完培,繼續(xù)過48小時之后看培養(yǎng)狀態(tài),密度起來的話,再往瓶子補(bǔ)加1ml的完培,繼續(xù)過48小時之后看培養(yǎng)狀態(tài),這個時候應(yīng)該密度高起來了,就可以收集液體離心1:2傳代,每瓶豎著培養(yǎng)液也是3-4ml的完培培養(yǎng)。
C、細(xì)胞凍存:收集細(xì)胞懸液,1000rpm 條件下離心 5-8min,去除上清,按凍存數(shù)量(推薦每支凍存管5×106左右細(xì)胞數(shù)量凍存),加入1ml的我司無血清凍存液(貨號:C7001),輕輕混勻后,放-80℃冰箱,24小時后轉(zhuǎn)入液氮罐中。
D、細(xì)胞復(fù)蘇:從液氮灌或-80℃冰箱中找到需要復(fù)蘇的細(xì)胞,水浴鍋提前打開預(yù)熱37℃。
1) 將凍存細(xì)胞在37℃水浴中迅速搖晃解凍;
2) 將凍存管中的細(xì)胞移至含5ml完全培養(yǎng)基的離心管中,1000 rpm離心5min;
3) 棄去上清液,補(bǔ)加5mL完全培養(yǎng)基后吹勻,接種于T25培養(yǎng)瓶中(或6cm皿中),培養(yǎng)過夜,第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
五、售后服務(wù)告知書
1)細(xì)胞出現(xiàn)問題,可重發(fā)的情況有哪些?判定標(biāo)準(zhǔn)是什么?
1. 細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問題,細(xì)胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等,重發(fā);
2. 細(xì)胞污染問題,請?jiān)谑盏疆a(chǎn)品48小時內(nèi),給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,核實(shí)后重發(fā);
3. 常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置24小時后,干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后24小時后,絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,(需提供真實(shí)清晰的細(xì)胞狀態(tài)照片),重發(fā);
4. 干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后24小時后或常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置4小時候并且未開封,出現(xiàn)污染,重發(fā);
5. 細(xì)胞活性問題,請?jiān)谑盏疆a(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,核實(shí)后予重發(fā);
6. 細(xì)胞收到當(dāng)天以及第2,3天請拍照,3天未告知的,視為產(chǎn)品合格。4-7天內(nèi)出現(xiàn)問題有提供收到細(xì)胞前3天照片和細(xì)胞出現(xiàn)問題時照片以及細(xì)胞相關(guān)操作的詳細(xì)步驟的,并跟技術(shù)人員溝通的,由技術(shù)人員判定為我方責(zé)任的,重發(fā)。技術(shù)人員判定為雙方承擔(dān)責(zé)任的由雙方進(jìn)行協(xié)商處理或者按合同價(jià)的50%收費(fèi)重發(fā)。
二)細(xì)胞出現(xiàn)問題,不予以重發(fā)的情況有哪些?
1. 客戶造成細(xì)胞污染,不重發(fā);
2. 客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā);
3. 非本庫推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā);
4. 細(xì)胞狀態(tài)不好,未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的,不重發(fā);
5. 細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的,不重發(fā);
6. 細(xì)胞收到2天內(nèi),未告知,不重發(fā);
7. 視具體情況而定。
發(fā)表中文論文標(biāo)注:(細(xì)胞名稱貨號)由上海雅吉生物科技有限公司提供;
發(fā)表英文論文標(biāo)注:(細(xì)胞名稱貨號)Provided by Shanghai Yaji Biotechnology Co., Ltd
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