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CAD小鼠神經元細胞培養(yǎng)說明書

發(fā)布時間:2024/12/2 9:23:38      閱讀次數(shù):91

 CAD小鼠神經元細胞培養(yǎng)說明書

一、細胞培養(yǎng)條件

培養(yǎng)條件

空氣,95%;CO25% ;37℃

生長特性

貼壁生長

凍存條件

無血清凍存液(貨號:C7001)

培養(yǎng)體系

DMEM+10%FBS+1%P/S

傳代方法

第一次建議1:2傳代 

傳代情況

2天換液

備注

天氣寒冷可能會導致細胞冷縮脫落,如脫落較多,參考下列(四、注意事項),如脫落不多正常操作即可。瓶中完培可收集使用。

二、細胞收貨后處理

A、復蘇細胞處理方法:培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是運輸細胞的最好辦法。收到細胞用75%酒精噴灑整個細胞,嚴格無菌將細胞瓶放置培養(yǎng)箱中靜置2-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài)靜置后顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照保存(最好40x,100x,200x各一張)前三天照片重要售后依據(jù),不提供照片默認收到狀態(tài)良好。

B、凍存細胞處理方法:收到細胞后,觀察泡沫箱中干冰是否有剩余,凍存管是否完好無損是否有解凍情況,若發(fā)現(xiàn)干冰完全汽化或凍存管有解凍破損現(xiàn)象,請及時拍照并與我們聯(lián)系。如果細胞簽收三天內未與我們聯(lián)系,則默認為收貨良好。復蘇第一管如有活性問題,請及時聯(lián)系我們,技術人員與您溝通指導后再復蘇第 二管,未與我方聯(lián)系擅自復蘇第二管出現(xiàn)問題不予售后。

三、細胞培養(yǎng)步驟

a、細胞傳代細胞密度80%,即可進行傳代培養(yǎng),步驟如下:

1) 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次;

2) 加1-2mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置培養(yǎng)箱中消化 1-2min ,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后,加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化;

3) 輕輕吹打細胞,完全脫落后吸出至離心管中,1000 rpm離心5-8min,棄去上清液,補加1-2mL完全培養(yǎng)基后吹勻;

4) 按5-6mL每瓶補加完全培養(yǎng)基,將細胞懸液按1:2的比例分到新的含5-6 mL完全培養(yǎng)基的6cm培養(yǎng)皿中或者T25培養(yǎng)瓶中。

(即1個T25瓶傳代接種至2個T25瓶或者2個6cm的培養(yǎng)皿)

b、細胞凍存:細胞收集參照傳代步驟,按凍存數(shù)量推薦每支凍存管5×106左右細胞數(shù)量凍存,加入1ml的我司無血清凍存液(貨號:C7001),輕輕混勻后,放-80℃冰箱,24小時后轉入液氮罐中

C、細胞復蘇:從液氮灌或-80℃冰箱中找到需要復蘇的細胞,水浴鍋提前打開預熱37℃。

1) 將凍存細胞在37℃水浴中迅速搖晃解凍;

2) 將凍存管中的細胞移至含5ml完全培養(yǎng)基的離心管中,1000 rpm離心5min;

3) 棄去上清液,補加5mL完全培養(yǎng)基后吹勻,接種于T25培養(yǎng)瓶中或6cm皿中,培養(yǎng)過夜,第二天換液并檢查細胞密度。

四、注意事項:有些細胞貼壁不牢,在運輸過程中細胞容易脫落,這是正常現(xiàn)象。如脫落較多可將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管,1000rpm離心5-8min,收集上清作過渡培養(yǎng),沉淀加入胰酶1-2ml,輕輕吹打,重懸,消化1-2分鐘后,加5ml完全培養(yǎng)基終止反應。再離心,棄上清,加1-2ml完全培養(yǎng)基重懸。然后按1:2比例進行分瓶傳代,補充新的完全培養(yǎng)基至5-6ml/瓶,最后放入細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

五、售后條款:

1)細胞出現(xiàn)問題,可重發(fā)的情況有哪些?判定標準是什么?

1. 細胞運輸途中遭遇的各種問題,細胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液等,重發(fā);

2. 細胞污染問題,請在收到產品48小時內,給我們提出真實的實驗結果,核實后重發(fā);

3. 常溫發(fā)貨的細胞靜置24小時后,干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇后24小時后,絕大多數(shù)細胞未存活,(需提供真實清晰的細胞狀態(tài)照片),重發(fā);

4. 干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇后24小時后或常溫發(fā)貨的細胞靜置4小時候并且未開封,出現(xiàn)污染,重發(fā);

5. 細胞活性問題,請在收到產品7天內給我們提出真實的實驗結果,用臺盼藍染色法鑒定細胞活力,核實后予重發(fā);

6. 細胞收到當天以及第2,3天請拍照,3天未告知的,視為產品合格。4-7天內出現(xiàn)問題有提供收到細胞前3天照片和細胞出現(xiàn)問題時照片以及細胞相關操作的詳細步驟的,并跟技術人員溝通的,由技術人員判定為我方責任的,重發(fā)。技術人員判定為雙方承擔責任的由雙方進行協(xié)商處理或者按合同價的50%收費重發(fā)。

2細胞出現(xiàn)問題,不予以重發(fā)的情況有哪些?

1. 客戶造成細胞污染,不重發(fā);

2. 客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好,不重發(fā);

3. 非本庫推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好,不重發(fā);

4. 細胞狀態(tài)不好,未提供細胞培養(yǎng)前3天照片的,不重發(fā);

5. 細胞培養(yǎng)時經其它處理的,不重發(fā);

6. 細胞收到2天內,未告知,不重發(fā);

7. 視具體情況而定。 

 

發(fā)表中文論文標注:(細胞名稱貨號)由上海雅吉生物科技有限公司提供;

發(fā)表英文論文標注:(細胞名稱貨號)Provided by Shanghai Yaji Biotechnology Co., Ltd CAD小鼠神經元細胞培養(yǎng)說明書


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