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常用人肝癌細(xì)胞系有哪些及如何選擇

發(fā)布時間:2024/12/16 9:43:04      閱讀次數(shù):79

 肝癌細(xì)胞株(Cell Strain)是通過克隆培養(yǎng)法或通過篩選培養(yǎng)法從肝癌病理組織中分離出單細(xì)胞后, 由單個細(xì)胞不斷分裂增殖形成的細(xì)胞群,具有與原代組織極為相似的特性和人體完整的遺傳基因,并能穩(wěn)定傳代。人肝癌細(xì)胞株因其分離來源的親本患者不同故名稱各異, 所以根據(jù)它的來源不同而命名的細(xì)胞株稱為人肝癌細(xì)胞系。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。原代培養(yǎng)物經(jīng)首次傳代成功后即為細(xì)胞系(cell line), 由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細(xì)胞世系所組成。如果不能繼續(xù)傳代,或傳代次數(shù)有限,可稱為有限細(xì)胞系(finite cell line), 如可以連續(xù)培養(yǎng), 則稱為連續(xù)細(xì)胞系(continuous cell line), 培養(yǎng)50代以上并無限培養(yǎng)下去。 所以細(xì)胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得的具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志的培養(yǎng)細(xì)胞。從培養(yǎng)代數(shù)來講,可培養(yǎng)到40-50代。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。對于人類肝癌細(xì)胞,在體外培養(yǎng)半年以上,生長穩(wěn)定,并連續(xù)傳代的即可稱為連續(xù)性株或系。

肝細(xì)胞癌(HCC)是一種最常見的腫瘤,也是全球引發(fā)癌癥患者死亡的第3大原因。人肝癌細(xì)胞系也可作為化學(xué)誘變劑誘發(fā)肝癌的實驗對象, 它的研究結(jié)果比用動物肝癌細(xì)胞系作為材料的研究結(jié)果與人體內(nèi)肝癌環(huán)境更接近, 更能反映人體內(nèi)肝癌的信息。下面來對目前較為常用的幾株人肝癌細(xì)胞系SMMC-7721、Bel-7402、MHCC97、HepG2、Hep3B、Huh-7 and PLC/PRF/5的特性、優(yōu)勢及其在實驗中的應(yīng)用進(jìn)行整理,為腫瘤學(xué)者實驗研究提供參考。

常用人肝癌細(xì)胞系

1.SMMC-7721 人肝癌細(xì)胞株

SMMC-7721人肝癌細(xì)胞株圖

SMMC-7721細(xì)胞系是于1977年建立,材料取自一名50歲男性原發(fā)性肝細(xì)胞癌HCC患者的手術(shù)切除標(biāo)本進(jìn)行體外培養(yǎng)而得。其生物學(xué)特性如下:細(xì)胞系生長較迅速穩(wěn)定,在原代細(xì)胞開始傳代階段增殖緩慢,以后趨于穩(wěn)定而迅速生長,細(xì)胞形態(tài)為上皮樣,貼壁生長,細(xì)胞的亞微結(jié)構(gòu)形態(tài)符合癌細(xì)胞的一般特征,甲胎蛋白(a-fetoprotein, AFP)免疫熒光染色呈陽性;LDH同工酶譜的變化與肝癌細(xì)胞的一般特征一致;免疫缺陷小鼠體內(nèi)可成瘤率高,動物異種后瘤結(jié)節(jié)經(jīng)病理切片檢查,其組織形態(tài)和原手術(shù)切除標(biāo)本類似。

2.Bel-7402 人肝癌細(xì)胞株

Bel-7402于1974年建立,來源于一位53歲男性肝癌患者的手術(shù)切除標(biāo)木,屬于HCC。生物學(xué)特性如下:細(xì)胞增長迅速而恒定,6-7 d可傳代1次,細(xì)胞形態(tài)以多邊形,上皮樣占絕大多數(shù),貼壁生長,細(xì)胞染色體中有一大而長的近端著絲點染色體,出現(xiàn)頻率高,是本株細(xì)胞的標(biāo)記染色體;AFP免疫熒光反應(yīng)陽性;LDH、 G6PD、TAT等酶代謝及細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)基本上保持臨床人體肝癌的特性;異種接種后成瘤率高,3-4d 可成瘤,瘤塊組織學(xué)病理與臨床HCC相近。

3.MHCC97 人肝癌細(xì)胞株

MHCC97細(xì)胞系由上海醫(yī)科大學(xué)中山醫(yī)院建立,將一名我國39歲男性HCC患者的肝右葉轉(zhuǎn)移病灶的手術(shù)切除標(biāo)本接種于裸鼠肝內(nèi)建造出人肝癌裸鼠轉(zhuǎn)移模型(LCI-D20)而得。已證實,經(jīng)過再次分離得到的MHCC97H、MHCC97L及HCCLM3 3種細(xì)胞株,依據(jù)它們的轉(zhuǎn)移特點,雖來源同一父系,但具有異質(zhì)性,即具有不同的轉(zhuǎn)移潛能。

MHCC97人肝癌細(xì)胞系于1998年從裸鼠人肝癌轉(zhuǎn)移模型(LCI-D20)體外傳代培養(yǎng)獲得,該細(xì)胞系符合一般人惡性腫瘤的病理學(xué)和遺傳學(xué)特征,細(xì)胞呈上皮樣,貼壁生長,血清HBsAg、AFP高表達(dá),成瘤率高且優(yōu)先轉(zhuǎn)移的靶器官是肺,肺轉(zhuǎn)移率100%,故證實該細(xì)胞系為高轉(zhuǎn)移特性的人肝癌細(xì)胞系。

2001年,研究者從MHCC97細(xì)胞系中發(fā)現(xiàn)并分離出不同轉(zhuǎn)移潛能的2個細(xì)胞系MHCC97-H和MHCC97-L,前者肺轉(zhuǎn)移率100%,后者40%;從生長速度上,前者細(xì)胞倍增時間較后者短;穿透人工基底膜能力前者較后者大;前者均較后者活 力強、代謝旺。傳代至20代后,兩種形態(tài)學(xué)特征及生長速度方面均較穩(wěn)定。之后又從MHCC97-H裸鼠接種后成功得到更高轉(zhuǎn)移潛能的HCCLM3細(xì)胞系。

4.HepG2人肝丹細(xì)胞瘤

1979年,從阿根廷一名15歲高加索男孩的原發(fā)性肝胚細(xì)胞瘤中分離出并建立,該細(xì)胞系呈上皮樣,貼壁抱團(tuán)生長,生長較快,傳代周期為1-2d, 低轉(zhuǎn)移,裸鼠中成瘤率較差,AFP 陽性, HBsAg陰性,然而目前尚未證明該細(xì)胞中有乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)基因組;但通過實驗已證實,該細(xì)胞系分化程度較高,細(xì)胞里代謝酶的生物轉(zhuǎn)化特性較完整,不需加入外源性活化系統(tǒng)。在藥物作用相關(guān)研究中代謝酶保持穩(wěn)定,不會因傳代次數(shù)增多而有所改變,所含有的生物轉(zhuǎn)化代謝酶與人正常肝實質(zhì)細(xì)胞同源,因此,常被用于體外肝細(xì)胞代謝或遺傳毒性試驗方面的理想細(xì)胞系。

其中,HepG2.2.15 是目前應(yīng)用較為廣泛的細(xì)胞株,它是HepG2的衍生物是體外篩選抗HBV藥物的良好模型,并用于抗HBV新藥開發(fā)的體外研究工具。

5.Hep3B人肝癌細(xì)胞株

Hep3B分離自8歲美國黑人男童的肝癌組織。細(xì)胞形態(tài)跟HepG2類似,呈上皮細(xì)胞,電鏡下觀察胞漿里面很多粗大的黑顆粒,同樣喜抱團(tuán)貼壁生長,其在裸鼠中能致瘤,但基本不轉(zhuǎn)移。HBV陽性,這與HepG2不同,這株細(xì)胞整合了完整的HBV基因組,可用于HBV感染后發(fā)展致癌相關(guān)研究。

6.Huh-7人肝癌細(xì)胞株

Huh-7細(xì)胞系于1982年從一名患有肝癌的57歲日本男性肝癌組織標(biāo)本上培養(yǎng)而得。該細(xì)胞AFP陽性,高度分化,細(xì)胞呈上皮樣,貼壁生長,特點是HBV陰性,而具有內(nèi)型肝炎病毒(hepatitis C  virus,HCV)易感性,故可用于HCV與肝癌的關(guān)系的研究。除了用于研究致癌性,還用于基因表達(dá)的調(diào)節(jié)機(jī)制、新陳代謝及VLDL的分泌等。此細(xì)胞系的特別之處如下:可用于生產(chǎn)重組蛋白如促紅細(xì)胞生成素;在蛋白質(zhì)生物學(xué)方面用于研究在肝細(xì)胞內(nèi)復(fù)制的登革病毒;廣泛用于異種移植動物模型。

7.PLC/PRF/5 人肝癌亞歷山大細(xì)胞

PLC/PRF/5人肝癌亞歷山大細(xì)胞于1976 年建系,細(xì)胞來自一位患有原發(fā)性HCC的莫桑比克男性患者的標(biāo)本,為上皮樣貼壁生長, AFP陽性,不產(chǎn)生白蛋白,分泌ad亞型的HBsAg而不產(chǎn)生HBcAg或HBeAg和Dane顆粒,卻可維持HAV的繁殖,該細(xì)胞可能含有全部HBV基因組,同工酶譜及核型與人類同源;裸鼠異種移植可致瘤。此細(xì)胞系因其產(chǎn)生HBsAg的物理化學(xué)和免疫化學(xué)特性跟HBV攜帶者血清中HBsAg相似,因此,可被用來研究HBV體外病毒及其與原發(fā)性肝癌的關(guān)聯(lián),抗HBV疫苗所需的HBsAg顆粒的制備及抗病毒藥物的制備等方面。

人肝癌細(xì)胞系具有以下優(yōu)點

首先,在選擇實驗對象的比較上,人肝癌細(xì)胞系相較于人原代肝細(xì)胞,克服了人原代肝細(xì)胞來源困難、實驗難控制、存活時間短的局限,肝癌細(xì)胞系為已獲得的穩(wěn)定傳代的細(xì)胞,具有來源方便、操作簡單、條件可控和可重復(fù)等優(yōu)點,是用于肝癌疾病相關(guān)研究的理想對象。

其次,肝癌細(xì)胞系均選擇來源于確診肝癌患者的病理組織,具有與肝癌患者體內(nèi)相似的遺傳基因組,其發(fā)生發(fā)展機(jī)制、功能蛋白表達(dá)、病毒復(fù)制能力、侵襲轉(zhuǎn)移功能及抗藥性等,具有與人類親源體極其相近的特點,因此更適合應(yīng)用于肝癌各領(lǐng)域的研究.

人肝癌細(xì)胞系選擇

那么人肝癌細(xì)胞株如何選擇呢?一方面你可以查找相關(guān)的文獻(xiàn),另一方面可以考慮選擇幾株常用的肝癌細(xì)胞株,然后進(jìn)行驗證,如WB、QPCR驗證目標(biāo)基因的情況,從而選擇一株最佳的細(xì)胞來完成后期的研究。


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