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發(fā)布時(shí)間:2020/9/4 13:02:56 閱讀次數(shù):2063
我們公司貼壁細(xì)胞的常規(guī)運(yùn)輸方式是將細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿新鮮的完全培養(yǎng)液并封好瓶口進(jìn)行運(yùn)輸.冬季溫度比較低的情況下,我們會(huì)根據(jù)收貨人所在省份的平均溫度高低和距離采取對(duì)細(xì)胞不同狀態(tài)下發(fā)貨,包括活細(xì)胞瓶裝發(fā)貨 活細(xì)胞胰酶消化離心后血清發(fā)貨 凍存管發(fā)貨.客戶收到細(xì)胞后請(qǐng)嚴(yán)格按照以下要求進(jìn)行操作.
1 客戶在收到瓶裝細(xì)胞后,先觀察培養(yǎng)瓶是否完好,培養(yǎng)液是否外滲,培養(yǎng)液是否混濁,若出現(xiàn)破裂 滲液 培養(yǎng)液混濁等問題,請(qǐng)?jiān)谑盏郊?xì)胞后的當(dāng)天與我們的銷售或技術(shù)支持聯(lián)系,我們會(huì)及時(shí)處理.
2 細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿新鮮的完全培養(yǎng)液(內(nèi)含細(xì)胞培養(yǎng)的血清含量和雙抗),封好瓶口是我們正常運(yùn)輸細(xì)胞的方法.細(xì)胞出庫(kù)前都是處于無菌狀態(tài),并且生長(zhǎng)良好,我們也會(huì)對(duì)出庫(kù)細(xì)胞進(jìn)行拍照留檔.(建議客戶在收到我們的細(xì)胞時(shí)將培養(yǎng)液拍照,觀察培養(yǎng)液的顏色以及是否漏液,觀察細(xì)胞時(shí)請(qǐng)拍100X 200X各2~3張照片進(jìn)行留存,方便細(xì)胞狀態(tài)的對(duì)比,拍攝的照片應(yīng)當(dāng)清晰).
3 若客戶收到:貼壁瓶裝細(xì)胞后不開封,先將培養(yǎng)瓶外表面用75%的酒精擦拭干凈,鏡檢細(xì)胞貼壁情況.若貼壁良好,請(qǐng)將細(xì)胞整瓶放于培養(yǎng)箱穩(wěn)定1-2小時(shí)后拿出,瓶蓋開啟前請(qǐng)將培養(yǎng)瓶瓶口再次消毒 過火,再將多余培養(yǎng)液抽出進(jìn)行繼續(xù)培養(yǎng),或直接進(jìn)行細(xì)胞傳代(消化 傳代步驟詳見細(xì)胞說明書);若貼壁細(xì)胞有部分懸浮,請(qǐng)先將細(xì)胞整瓶放于培養(yǎng)箱穩(wěn)定1-2小時(shí)后拿出,瓶蓋開啟前請(qǐng)將培養(yǎng)瓶口再次消毒過火,將培養(yǎng)液抽出,依次離心(1000rmp 5min)將懸浮細(xì)胞收集后放回原瓶進(jìn)行過夜培養(yǎng),并次日觀察貼壁情況.如細(xì)胞仍不能貼壁,請(qǐng)用臺(tái)盼藍(lán)染色鑒定細(xì)胞活力,證實(shí)細(xì)胞無活力,請(qǐng)將細(xì)胞拍照(多倍數(shù)多視野)及染色照片發(fā)送給我們.我們會(huì)盡快處理.(以上僅為貼壁細(xì)胞處理方法).
4 若客戶收到:懸浮瓶裝細(xì)胞后不開封,先將培養(yǎng)瓶外表面用酒精擦拭干凈,鏡檢細(xì)胞狀態(tài).若狀態(tài)良好,請(qǐng)將細(xì)胞整瓶放于培養(yǎng)箱穩(wěn)定1-2小時(shí)后拿出,瓶蓋開啟前請(qǐng)將培養(yǎng)瓶瓶口再次消毒 過火,將整瓶細(xì)胞懸液分別離心(1000rmp 5min)后收集于離心管中,視其離心后的細(xì)胞量進(jìn)行放回培養(yǎng)或分離培養(yǎng).(以上僅為懸浮細(xì)胞處理方法).
5 若客戶收到:半懸浮瓶裝細(xì)胞后不開封,先將培養(yǎng)瓶外表面用酒精擦拭干凈,鏡檢細(xì)胞狀態(tài).若狀態(tài)良好,請(qǐng)將細(xì)胞整瓶放于培養(yǎng)箱穩(wěn)定1-2小時(shí)后拿出,瓶蓋開啟前請(qǐng)將培養(yǎng)瓶瓶口再次消毒 過火,將整瓶細(xì)胞懸液中的上層懸浮細(xì)胞離心(1000rmp 5min)后收集于離心管中,重懸細(xì)胞后放回原瓶與貼壁細(xì)胞共同培養(yǎng)至傳代.重懸上層懸浮細(xì)胞時(shí)必須保持下層貼壁細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)條件,防止貼壁細(xì)胞缺乏營(yíng)養(yǎng).(以上僅為半懸浮細(xì)胞處理方法).
6 若客戶收到:1.8ml離心管常溫細(xì)胞,收到細(xì)胞后觀察是否管裂 漏液 污染,若有以上任何一種情況,請(qǐng)立即拍照后聯(lián)系我們.若無以上情況,請(qǐng)用75%酒精對(duì)離心管進(jìn)行消毒后放到操作臺(tái),嚴(yán)格無菌操作,過火打開管蓋,將管中的血清細(xì)胞輕輕吹打幾下,取出后放入15ml離心管中,加入雙倍或3倍的完全培養(yǎng)液1000rmp/5min離心,棄上清重懸后與對(duì)應(yīng)的完全培養(yǎng)液混勻,加入到培養(yǎng)瓶中過夜培養(yǎng),第二天觀察細(xì)胞狀態(tài)和密度.若密度未達(dá)到85%則繼續(xù)培養(yǎng),若達(dá)到85%以上則可以直接進(jìn)行傳代.收到細(xì)胞過夜培養(yǎng)24小時(shí)后發(fā)現(xiàn)細(xì)胞污染或狀態(tài)不佳,必須在發(fā)現(xiàn)問題的當(dāng)天即刻向我們銷售人員反饋(以上僅為血清運(yùn)輸細(xì)胞處理方法).
7 若客戶收到:凍存管細(xì)胞,請(qǐng)盡快復(fù)蘇.復(fù)蘇方法:
1)37°水浴晃動(dòng)直至融化(不要超過一分鐘),移至15ml離心管,另加入3-5倍完全培養(yǎng)液,1000rmp 5min,棄上清,放入25cm2瓶中培養(yǎng),第二天拍照留存有效信息.
2)37°水浴晃動(dòng)直至融化(不要超過一分鐘),直接放進(jìn)加有6-8ml培養(yǎng)基的25cm2瓶中培養(yǎng),16小時(shí)后必須換液拍照留存有效信息.
8 客戶收到細(xì)胞時(shí)無異常,請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度,如貼壁細(xì)胞密度未超過85%則繼續(xù)培養(yǎng),超過85%時(shí)請(qǐng)按照細(xì)胞實(shí)驗(yàn)說明書進(jìn)行傳代培養(yǎng);如為懸浮細(xì)胞或半懸浮細(xì)胞,具體操作請(qǐng)按照細(xì)胞使用說明書進(jìn)行操作.
9 我們認(rèn)為細(xì)胞購(gòu)買者或使用者均有細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn),客戶收到細(xì)胞,原瓶里的培養(yǎng)液可以重新收集使用(僅限近距離運(yùn)輸客戶).在第一次消化傳瓶時(shí),我們建議客戶留部分細(xì)胞繼續(xù)使用我們的培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng),另外一部分細(xì)胞,客戶可使用自己的培養(yǎng)液培養(yǎng),這樣可以減少由于細(xì)胞不適應(yīng)環(huán)境導(dǎo)致的細(xì)胞培養(yǎng)問題,并且能對(duì)細(xì)胞的培養(yǎng)環(huán)境做出對(duì)比.如果兩組細(xì)胞的生長(zhǎng)速度和細(xì)胞狀態(tài)無明顯變化,客戶可繼續(xù)培養(yǎng)擴(kuò)增,如果兩組細(xì)胞生長(zhǎng)速度和細(xì)胞狀態(tài)有變化,那么我們建議客戶需要更換更好的血清培養(yǎng)細(xì)胞.
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