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LMH雞肝癌細胞

發(fā)布時間:2020/9/30 11:24:04      閱讀次數(shù):2079

LMH雞肝癌細胞

培養(yǎng)說明書

一 細胞培養(yǎng)條件

英文名稱

LMH

中文名稱

雞肝癌細胞

生長特性

貼壁生長

凍存條件

無血清凍存液

培養(yǎng)體系

DMEM/F12+10%特級FBS,細胞貼壁性差,補液的時候不要沖刷到細胞層,2-3天換液,90%以上匯合度傳代,傳代比例1:3-1:6,每隔2-3天傳代

傳代方法

第一次建議1:2傳代 

傳代情況

2天換液

備注

用無菌離心管收集瓶子培養(yǎng)基,留作過渡培養(yǎng)

二 細胞收到后處理

細胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細胞運輸?shù)淖詈棉k法.收到細胞回到自己的實驗室后,先打開外包裝,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內(nèi),嚴格無菌操作,培養(yǎng)箱靜置2-4小時.鏡下觀察:未超過80%匯合度時,可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中,加入6ml完全培養(yǎng)基,放入37℃ 5%CO2孵箱培養(yǎng);超過80%匯合度時,根據(jù)情況傳代或者凍存,具體操作見細胞培養(yǎng)步驟.注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話,放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松

三 細胞培養(yǎng)步驟

1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻.在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻.然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?/font>6cm皿中,培養(yǎng)過夜.第二天換液并檢查細胞密度.

2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng).

1 對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣 鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次.

2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化.

3.輕輕吹打細胞,完全脫落后吸出,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻.

4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液,將細胞懸液按1:2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中.

PS若客戶收到2ml小管細胞,收到細胞后,用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內(nèi),嚴格無菌操作;將小管細胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿,加入5ml左右完全培養(yǎng)基混勻,放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度:若密度未超過80%,換液繼續(xù)培養(yǎng),視情況傳代或者凍存.若密度超過80%,可直接進行傳代(方法同上).

 

3)細胞凍存:

1 細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細胞一次;2 添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化,輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心5min;

3 用適量的凍存液重懸細胞,并放置于凍存管中;

4 先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h,然后將其移入-80℃.


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