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發(fā)布時間：2020/10/21 17:17:52 閱讀次數(shù)：1386
全蛋白提取試劑盒
有效期：1 年.
產(chǎn)品組成：
| 名稱 | 50T | 100T | 儲存條件 |
| 裂解液（強(qiáng)） | 50 ml | 100 ml | 2-8 ℃ |
| 磷酸酶抑制劑（100×） | 0.5ml | 1ml |
-20℃ |
| 蛋白酶抑制劑（100×） | 0.5ml | 1ml | |
| PMSF（100×） | 0.5ml | 1ml |
產(chǎn)品說明：
本試劑盒用于哺乳動物組織和細(xì)胞中提取總蛋白,試劑盒中的裂解液含有蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑,作用較為強(qiáng)烈,可快速獲得總蛋白,可用于免疫印跡實(shí)驗(yàn)等基礎(chǔ)研究實(shí)驗(yàn),由于含有上述的酶抑制劑,不能用于研究蛋白激酶和磷酸激酶的研究.本品僅用于科研.
操作方法：
1 組織總蛋白的提取
1） 在 1ml 的冷裂解液中各加入 10ul 的磷酸酶抑制劑 蛋白酶抑制劑和 PMSF；混勻,放置在冰上備用；
2） 稱取 0.1g 的新鮮組織,放置于玻璃勻漿器的入口緩沖處,用眼科剪將組織塊盡可能的剪碎,然后加入 0.5-1ml 的新配置的裂解液,研磨直至沒有明顯的組織塊,這個過程注意冰上操作；
3） 將組織勻漿液移入 1.5ml 的 EP 管中,4 ℃ 12000g 離心 30min；
4） 吸取上清至新的管中；
5） 進(jìn)行蛋白定量或者變性進(jìn)行蛋白實(shí)驗(yàn).
（提取好的蛋白建議保存于-80℃,即用即取,避免反復(fù)凍融,避免長時間儲存.）
2 細(xì)胞總蛋白的提取
1） 裂解液的用量：107 個細(xì)胞需要裂解液 1ml；
2） 貼壁細(xì)胞：棄去培養(yǎng)基,用冷的 PBS 洗兩次,棄去 PBS,然后加入計算好的細(xì)胞裂解液；在冰上用細(xì)胞刮刀進(jìn)行刮離細(xì)胞,將刮離的細(xì)胞裂解液移入 EP 管中,顛倒裂解 20-30min.
3） 懸浮細(xì)胞：4℃ 400g 離心收集細(xì)胞,用冷的 PBS 洗兩次細(xì)胞,同樣按細(xì)胞數(shù)加入裂解液,渦旋
10s,放置冰上裂解 10min,重復(fù) 3-4 次；
全蛋白提取試劑盒裂解完畢之后,將細(xì)胞裂解液 4 ℃12000g 離心 30min；
5） 將上清移入新的 EP 管中；進(jìn)行蛋白定量或者變性進(jìn)行蛋白實(shí)驗(yàn).
（提取好的蛋白建議保存于-80℃,即用即取,避免反復(fù)凍融,避免長時間儲存.）
注意事項(xiàng)：
1. 實(shí)驗(yàn)過程,所有試劑都要需要預(yù)冷或者即融,保證操作過程中的低溫環(huán)境.
2. PSMF（有毒）現(xiàn)用現(xiàn)加,因?yàn)?/font> PMSF 在水溶液中會快速降解.
全蛋白提取試劑盒
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