小鼠胚胎成纖維細(xì)胞MEF培養(yǎng)說明書

一 細(xì)胞培養(yǎng)條件

二 細(xì)胞收到后處理

細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)淖詈棉k法.收到細(xì)胞回到自己的實驗室后,先打開外包裝,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內(nèi),嚴(yán)格無菌操作,培養(yǎng)箱靜置2-4小時.鏡下觀察：未超過80%匯合度時,可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中,加入6ml完全培養(yǎng)基,放入37℃ 5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時,根據(jù)情況傳代或者凍存,具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟.（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話,放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松）

三 細(xì)胞培養(yǎng)步驟

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻.在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻.然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中）,培養(yǎng)過夜.第二天換液并檢查細(xì)胞密度.

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng).

1 對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法： 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞MEF培養(yǎng)說明書

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣 鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次.

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化.

3.輕輕吹打細(xì)胞,完全脫落后吸出,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻.

4. 按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液,將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中.

PS：若客戶收到2ml小管細(xì)胞,收到細(xì)胞后,用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內(nèi),嚴(yán)格無菌操作；將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿,加入5ml左右完全培養(yǎng)基混勻,放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度：若密度未超過80%,換液繼續(xù)培養(yǎng),視情況傳代或者凍存.若密度超過80%,可直接進(jìn)行傳代（方法同上）.

售后服務(wù)告知書

一 收到細(xì)胞處理方法

1. 收到細(xì)胞先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置若干小時（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài).接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時就整體外觀拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài),100×,200×各一張）,觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過程中是否有污染情況.作為我方進(jìn)行售后的依據(jù).

2. 收到細(xì)胞未開封,出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費重發(fā)一次細(xì)胞.

3. 由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境 操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩氐挠绊?故本公司只保證客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài),故客戶需要售后是需出示收到細(xì)胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發(fā)現(xiàn)問題后與客服人員溝通的時間證明,期間間隔時間不能大于7天.

4. 如客戶對細(xì)胞的種類 純度 活性等特性有疑問,需提供相應(yīng)的生物學(xué)實驗檢測結(jié)果作為依據(jù).

二 細(xì)胞出現(xiàn)問題,可重發(fā)的情況有哪些？判定標(biāo)準(zhǔn)是什么？

1. 細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問題,細(xì)胞丟失 瓶身破損 培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等,重發(fā)；

2. 細(xì)胞污染問題,請在收到產(chǎn)品48小時內(nèi),給我們提出真實的實驗結(jié)果,核實后重發(fā)；

3. 常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置24小時后,干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后24小時后,絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,（需提供真實清晰的細(xì)胞狀態(tài)照片）,重發(fā)；

4. 干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后24小時后或常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置4小時候并且未開封,出現(xiàn)污染,重發(fā)；

5. 細(xì)胞活性問題,請在收到產(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果,用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,核實后予重發(fā)；

6. 細(xì)胞收到當(dāng)天以及第2,3天請拍照,3天未告知的,視為產(chǎn)品合格.4-7天內(nèi)出現(xiàn)問題有提供收到細(xì)胞前3天照片和細(xì)胞出現(xiàn)問題時照片以及細(xì)胞相關(guān)操作的詳細(xì)步驟的,并跟技術(shù)人員溝通的,由技術(shù)人員判定為我方責(zé)任的,重發(fā).技術(shù)人員判定為雙方承擔(dān)責(zé)任的由雙方進(jìn)行協(xié)商處理或者按合同價的50%收費重發(fā).

三 細(xì)胞出現(xiàn)問題,不予以重發(fā)的情況有哪些？

1. 客戶造成細(xì)胞污染,不重發(fā)；

2. 客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā)；

3. 非本庫推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā)；

4. 細(xì)胞狀態(tài)不好,未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的,不重發(fā)；

5. 細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的,不重發(fā)；

6. 細(xì)胞收到2天內(nèi),未告知,不重發(fā)；

7. 視具體情況而定. 

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注意：若對細(xì)胞鑒定存在爭議,可以在收到細(xì)胞3個月內(nèi)提供真實有效的STR檢測證明,本公司承諾無條件退還細(xì)胞款項,其他情況本公司將不予受理.