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發(fā)布時間：2023/2/10 13:09:53 閱讀次數(shù)：370
| 產(chǎn)品名稱 | 人骨髓瘤細胞NCI-H929 | ||
| 生長特性 | 懸浮,圓形 | 凍存條件 | 無血清凍存液 |
| 培養(yǎng)體系 | 1640+10%FBS+100U/mlrm IL-2 | ||
| 傳代方法 | 第一次建議1:2傳代 | 傳代情況 | 2~3天換液/傳代 |
| 備注 | 懸浮細胞請離心收集,切勿直接倒掉細胞培養(yǎng)液,用無菌離心管收集瓶子培養(yǎng)基作過渡對比培養(yǎng),如對比培養(yǎng)效果不好,建議直接購買我們的完全培養(yǎng)基 | ||
一 細胞培養(yǎng)條件
二 細胞收到后處理
培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是運輸細胞的最好辦法.收到細胞用75%酒精噴灑整個細胞瓶,消毒后放到超凈臺內(nèi)嚴格無菌操作,將細胞瓶放入37℃ 5%CO2的培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài)后再做處理.顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照保存（最好40x,100x,200x各一張）,前三天照片是重要售后依據(jù),不提供照片默認收到狀態(tài)良好.（傳代后建議一瓶用原瓶的完全培養(yǎng)基,另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基,以便進行對比培養(yǎng),換液后將蓋子擰松）
三 細胞培養(yǎng)步驟
細胞傳代：如果未超過80%匯合度時,將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中,留5ml完全培養(yǎng)基,放入37℃ 5%CO2孵箱培養(yǎng)；如果細胞密度超80%,即可進行傳代培養(yǎng),傳代具體步驟如下細胞傳代：
a 對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中.
方法二：可選擇半數(shù)換液方式,棄半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中.
b 細胞凍存：
1 細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,將T25 培養(yǎng)瓶中的懸液收集至離心管中1000rpm
離心5min；
2 棄上清,沉淀細胞加入1ml/支的雅吉生物無血清凍存液（C7001）,混勻后加入凍存管中.（如：凍一支,加入 1ml 無血清凍存液即可）
3 將凍存細胞直接放入－80℃冰箱即可；如后期要將細胞轉(zhuǎn)入液氮罐中,需在-80℃冰箱存
放 24 小時以上.
C 細胞復蘇：
1 從液氮中取出細胞凍存管（注意佩戴防護面具）,快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結(jié)晶,然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；
2 將凍存管中的細胞移至含 5ml 完全培養(yǎng)基的15ml離心管中,1000rpm離心5min；
3 棄上清,沉淀用5ml完全培養(yǎng)基重懸,接種至T25培養(yǎng)瓶,放于37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4 第二天,換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng).
四 售后服務告知書
1）細胞出現(xiàn)問題,可重發(fā)的情況有哪些？判定標準是什么？
1. 細胞運輸途中遭遇的各種問題,細胞丟失 瓶身破損 培養(yǎng)液嚴重漏液等,重發(fā)；
2. 細胞污染問題,請在收到產(chǎn)品48小時內(nèi),給我們提出真實的實驗結(jié)果,核實后重發(fā)；
3. 常溫發(fā)貨的細胞靜置24小時后,干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇后24小時后,絕大多數(shù)細胞未存活,（需提供真實清晰的細胞狀態(tài)照片）,重發(fā)；
4. 干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇后24小時后或常溫發(fā)貨的細胞靜置4小時候并且未開封,出現(xiàn)污染,重發(fā)；
5. 細胞活性問題,請在收到產(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果,用臺盼藍染色法鑒定細胞活力,核實后予重發(fā)；
6. 細胞收到當天以及第2,3天請拍照,3天未告知的,視為產(chǎn)品合格.4-7天內(nèi)出現(xiàn)問題有提供收到細胞前3天照片和細胞出現(xiàn)問題時照片以及細胞相關(guān)操作的詳細步驟的,并跟技術(shù)人員溝通的,由技術(shù)人員判定為我方責任的,重發(fā).技術(shù)人員判定為雙方承擔責任的由雙方進行協(xié)商處理或者按合同價的50%收費重發(fā).
二）細胞出現(xiàn)問題,不予以重發(fā)的情況有哪些？
1. 客戶造成細胞污染,不重發(fā)；
2. 客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好,不重發(fā)；
3. 非本庫推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好,不重發(fā)；
4. 細胞狀態(tài)不好,未提供細胞培養(yǎng)前3天照片的,不重發(fā)；
5. 細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的,不重發(fā)；
6. 細胞收到2天內(nèi),未告知,不重發(fā)；
7. 視具體情況而定.
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