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容易長(zhǎng)泡泡的巨噬細(xì)胞——Raw264.7

發(fā)布時(shí)間：2023/5/29 8:56:08 閱讀次數(shù)：1066

容易長(zhǎng)泡泡的巨噬細(xì)胞——Raw264.7- 在培養(yǎng)過(guò)程中你是否遇到過(guò)細(xì)胞突然長(zhǎng)出“小角”？這個(gè)到底是什么？

- 其實(shí)這個(gè)“小角”俗稱(chēng)細(xì)胞的“偽足”是細(xì)胞分化導(dǎo)致的,雖然不影響細(xì)胞生長(zhǎng),但會(huì)影響到后期實(shí)驗(yàn)效果.那該如何避免它的發(fā)生,我們一起來(lái)研究一下.

培養(yǎng)條件：DMEM（高糖）+10%FBS+1%P/S

首先觀察下分化和不分化的生長(zhǎng)形態(tài)是怎樣的？

Raw264.7（未分化前）圖1

RAW264.7（分化后）圖2 僅供參考

圖1 為細(xì)胞正常形態(tài)呈不規(guī)則圓形,貼壁生長(zhǎng),未見(jiàn)觸角

圖2 可以清晰看見(jiàn)細(xì)胞長(zhǎng)出長(zhǎng)長(zhǎng)的角,可見(jiàn)細(xì)胞已經(jīng)分化

容易長(zhǎng)泡泡的巨噬細(xì)胞——Raw264.7如何收起他的小脾氣？

培養(yǎng)注意事項(xiàng)

｜該細(xì)胞傳代時(shí)不需要用胰酶消化,長(zhǎng)時(shí)間的胰酶消化會(huì)使細(xì)胞分化,長(zhǎng)出偽足,小脾氣就冒出來(lái)啦！

｜傳代時(shí)使用無(wú)菌細(xì)胞刮刀刮拭培養(yǎng)表面將細(xì)胞刮落,收集離心后重懸接種到新的培養(yǎng)瓶中.

｜傳代比例,盡量使細(xì)胞密度高于30%.

｜需使用較好的血清來(lái)進(jìn)行培養(yǎng).

正確的傳代步驟

｜用無(wú)菌細(xì)胞刮刀刮拭培養(yǎng)表面將細(xì)胞刮落

｜將刮下來(lái)的細(xì)胞用15ml離心管離心收集

｜1000rpm 離心5分鐘

｜去上清,用新鮮的完全培養(yǎng)基將細(xì)胞重懸

｜按比例接種到新的培養(yǎng)器皿中

小知識(shí)

RAW 264.7細(xì)胞系的起源

加利福尼亞索爾克研究所的W. C. Raschke在雄性BAB/14小鼠腹腔注射A-MuLV（Abelson鼠科白血病病毒）誘發(fā)腫瘤的腹水中建立了RAW 264細(xì)胞系.他發(fā)現(xiàn)RAW 264可以胞飲中性紅并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖,并且能通過(guò)抗體依賴(lài)途徑分解綿羊紅血球與腫瘤靶細(xì)胞.RAW 264.7不分泌A-MuLV（但用Moloney MuLV 拯救后可以在上清檢測(cè)到病毒）,對(duì)LPS非常敏感.該研究1978年發(fā)表在《CELL》雜志. 容易長(zhǎng)泡泡的巨噬細(xì)胞——Raw264.7