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1-3-β-D葡聚糖(1,3-β-DG)酶聯(lián)免疫分析(ELISA試劑盒使用說明書

發(fā)布時(shí)間:2023/7/14 8:53:25      閱讀次數(shù):727

 1-3-β-D葡聚糖(1,3-β-DG)酶聯(lián)免疫分析(ELISA試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用.

使用目的:

本試劑盒用于測定血清,血漿及相關(guān)液體樣本中1-3-β-D葡聚糖(1,3-β-DG)的含量.

實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用酶聯(lián)免疫競爭法測定標(biāo)本1-3-β-D葡聚糖(1,3-β-DG)水平.用純化的1-3-β-D葡聚糖(1,3-β-DG)抗體包被微孔板,制成固相體,往包被單抗的微孔中加入1-3-β-D葡聚糖(1,3-β-DG),和HRP標(biāo)記的1-3-β-D葡聚糖(1,3-β-DG)抗原,使它們競爭結(jié)合,,經(jīng)過徹底洗滌后底物TMB顯色.樣本顏色的深淺和樣品中的1-3-β-D葡聚糖(1,3-β-DG)的含量負(fù)相關(guān).用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品1-3-β-D葡聚糖(1,3-β-DG)的含量.  

試劑盒組成

1

30倍濃縮洗滌液

20ml×1

 

 

8

標(biāo)準(zhǔn)品S11600pg/ml

0.5ml×1

2

酶標(biāo)試劑

6ml×1

標(biāo)準(zhǔn)品S2800pg/ml

0.5ml×1

3

酶標(biāo)包被板

12×8

標(biāo)準(zhǔn)品S3400pg/ml

0.5ml×1

4

顯色劑A

6ml×1

標(biāo)準(zhǔn)品S4200pg/ml

0.5ml×1

5

顯色劑B

6ml×1

標(biāo)準(zhǔn)品S5100pg/ml

0.5ml×1  

6

終止液

6ml×1/

9

說明書

1

7

樣品稀釋液

6ml×1/

10

封板膜

2

 

標(biāo)本要求 

1.標(biāo)本處理:(1)水樣   采集后經(jīng) -20℃反復(fù)凍融三次,再經(jīng)玻璃纖維過濾后,備查

2)組織   樣品用丁醇:甲醇:水(52570 V:V:V)抽提,或按相關(guān)文獻(xiàn)提取進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn).若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,備查

2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性.

操作步驟

 

1. 加樣:分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔 空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同) 待測樣品孔.在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)孔中加50微升,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍).加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻.

2. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外.

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘.   

4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干.

6. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

7. 終止:每孔加終止50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色).

8. 測定:以空白孔調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值). 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行.

 

計(jì)算

  以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度.

注意事項(xiàng)

1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存.

2濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果.

3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差.一次加樣時(shí)間最好控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣.

4. 請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,最好做復(fù)孔.如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計(jì)算時(shí)請最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5).

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染.

6.底物請避光保存.

7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理.

9.本試劑不同批號組分不得混用.

檢測范圍:

30pg/ml-1800pg/ml

規(guī)格:

96/

保存條件及有效期

1試劑盒保存:;2-8.

2.有效期:6個(gè)月


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