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人地方性斑疹傷寒抗體IgG(MT IgG)酶聯(lián)免疫分析試劑盒

發(fā)布時(shí)間:2023/7/14 8:53:43      閱讀次數(shù):914

 地方性斑疹傷寒抗體IgG(MT IgG)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

本試劑盒僅供研究使用.

                                                                     96T

 

使用目的:

本試劑盒用于測(cè)定人血清 血漿及相關(guān)液體樣本中地方性斑疹傷寒抗體IgG(MT IgG)表達(dá).

實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測(cè)定標(biāo)本地方性斑疹傷寒抗體IgG(MT IgG)表達(dá).用純化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,可與樣品中地方性斑疹傷寒抗體IgG(MT IgG)相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后再與HRP標(biāo)記的抗原結(jié)合,形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物,經(jīng)過(guò)徹底洗滌后底物TMB顯色.TMBHRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色.用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標(biāo)本中人地方性斑疹傷寒抗體IgG(MT IgG)的存在與否.

試劑盒組成

1

30倍濃縮洗滌液

20ml×1

7

終止液

6ml×1

2

酶標(biāo)試劑

6ml×1

8

陽(yáng)性對(duì)照

0.5ml×1

3

標(biāo)包被

12孔×8

9

陰性對(duì)照

0.5ml×1

4

樣品稀釋液

6ml×1

10

說(shuō)明書(shū)

1

5

顯色劑A

6ml×1

11

封板膜

2 

6

顯色劑B

6ml×1/

12

密封袋

1個(gè)

標(biāo)本要求 

1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn).若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性.

操作步驟

1. 編號(hào):將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2陽(yáng)性對(duì)照2孔 空白對(duì)照1孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)

2. 加樣:分別在陰 陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照 陽(yáng)性對(duì)照50μl.然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl.加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘.   

4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干.

6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外.

7. 溫育:操作同3.

8. 洗滌:操作同5.

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止:每孔加終止50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色).

11. 測(cè)定:以空白調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值). 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行.

 

計(jì)算和結(jié)果判定:

  試驗(yàn)有效性:陽(yáng)性對(duì)照孔平均值1.00; 陰性對(duì)照平均值0.20

  臨界值(CUT OFF)計(jì)算:臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15

  陰性判定:樣品OD< 臨界值(CUT OFF)者為地方性斑疹傷寒抗體IgG(MT IgG)陰性

  陽(yáng)性判定:樣品OD 臨界值(CUT OFF)者為地方性斑疹傷寒抗體IgG(MT IgG)陽(yáng)性.

注意事項(xiàng)

1.操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行,本試劑不同批號(hào)組分不得混用.

2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存.

3濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果.

4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染.

5.底物請(qǐng)避光保存.

6.試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí),參考波長(zhǎng)為630nm

7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理.終止液為2M的硫酸,使用時(shí)必須注意安全.

保存條件及有效期

1試劑盒保存:;2-8.

2.有效期:6個(gè)月

 


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