發(fā)布時間：2024/11/8 8:53:30 閱讀次數(shù)：251
產(chǎn)品及特點
嗜肺巴斯德桿菌PCR試劑盒可用于檢測嗜肺巴斯德桿菌.嗜肺巴斯德桿菌(Pasteurella pneumophila)在自 然界中分布廣泛,它有兩種生物型,主要感染嚙齒類動物,對實驗小鼠 大鼠和豚鼠的危 害較大.嗜肺巴斯德桿菌作為一種條件致病菌,能夠引起免疫缺陷動物或免疫功能低下的 動物產(chǎn)生嚴(yán)重的肺炎,并可能導(dǎo)致動物死亡.本產(chǎn)品是根據(jù) PCR 原理開發(fā)的嗜肺巴斯德 桿菌檢測試劑盒,它具有下列特點：
1. 即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板.
2. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品.
3. 產(chǎn)品精心優(yōu)化且特異性高,引物是根據(jù)嗜肺巴斯德桿菌 DNA 高度保守區(qū)設(shè)計, 不會跟除此之外的其它生物樣本 DNA 發(fā)生交叉反應(yīng).
4. PCR mix 中含上樣染料,擴(kuò)增反應(yīng)后可以直接上樣電泳.
5. 嗜肺巴斯德桿菌PCR試劑盒足夠 50 次 20μL 體系的PCR 反應(yīng).
6. 本產(chǎn)品只能用于定性實驗,不能用于定量.
7. 本產(chǎn)品只能用于科研.
成分規(guī)格
| 產(chǎn)品組成 | 編號 | 規(guī)格 |
| 2×Taq PCR Master Mix | GZ020101 | 550 μL |
| DEPC-H2O | GZ070401 | 1 mL |
| 嗜肺巴斯德桿菌 PCR 引物混合液 | GZ01345668yw | 60 μL |
| 嗜肺巴斯德桿菌 PCR 陽性對照 (1×10E5 拷貝/μL) |
GZ01345668pc |
50 μL |
保存條件
低溫運輸,-20℃保存,保存期限為一年.陽性對照需要單獨放置,不要污染其他試 劑.
使用方法
一 DNA 提取(樣本制備區(qū))
1. （選做）如果有 N 個樣品,必須設(shè)置 N+2 個提取反應(yīng),多出的兩個中一個是 PC （樣品制備陽性對照）,一個是 NC（樣品制備陰性對照）.可以用 10μL 嗜肺巴斯德桿菌 PCR 陽性對照（1×10E5 拷貝/μL,本試劑盒提供）再加上一定量的水作為制備的陽性對 照（加水后其總體積跟樣品一樣,樣品體積多少取決于所用試劑盒的要求）.可以用水 作為制備的陰性對照.
2. 用自選方法提取純化樣品 DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼 容.建議使用細(xì)菌基因組 DNA 提取試劑盒（Cat: GZ01201-50）提取 DNA.
二 試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))
準(zhǔn)備足量的 PCR 管（樣品管 陰性對照管 陽性對照管）,向各 PCR 管中分別加入 下列成分.
| 成分 | N 個 待檢樣品管 | PCR 陰性對照 | PCR 陽性對照 |
| 2×Taq PCR Master Mix | 各 10 μL | 10 μL | 10 μL |
| 嗜肺巴斯德桿菌 PCR 引物混合液 | 各 1 μL | 1 μL | 1 μL |
| DEPC-H2O | 7 μL | 7 μL | 7 μL |
轉(zhuǎn)移至模板添加區(qū).
三 添加模板(模板添加區(qū))
向 PCR 管中分別加入 2uL 模板,順序為陰性對照（DEPC-H2O） 待測樣品模板 嗜肺巴斯德桿菌 PCR 陽性對照,離心 30 秒,立即進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng).
四 擴(kuò)增反應(yīng)(擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū))
將 PCR 管放置在 PCR 擴(kuò)增儀器樣品槽相應(yīng)位置,進(jìn)行擴(kuò)增,擴(kuò)增程序如下：
| 過程 | 溫度 | 時間 |
| 預(yù)變性 | 95℃ | 3 min |
|
PCR 反應(yīng) （35 個循環(huán)） | 95℃ | 15 sec |
| 55℃ | 15 sec | |
| 72℃ | 15 sec | |
| 最后延伸 | 72℃ | 5 min |
五 電泳檢測
取 5-10 μL PCR 產(chǎn)物.電泳檢測 PCR 產(chǎn)物.本產(chǎn)品提供的 2×Taq PCR Master Mix 含 染料,在擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣,不需要另外再加 loading buffer.
嗜肺巴斯德桿菌PCR試劑盒樣本檢測結(jié)果：凝膠電泳圖譜中有 374-377bp 條帶,表明該樣本含有嗜肺巴斯德桿 菌,結(jié)果為陽性；無 374-377bp 條帶,該樣本不含嗜肺巴斯德桿菌,結(jié)果為陰性.
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