名稱	MLTC-1 (小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞) (STR鑒定正確)
別稱	mLTC-1; Murine Leydig Tumor Cell line-1
種屬	小鼠
年齡（性別）	雄
組織來(lái)源	睪丸；Leydig細(xì)胞；Leydig細(xì)胞瘤
生長(zhǎng)特性	貼壁細(xì)胞
細(xì)胞形態(tài)	上皮細(xì)胞樣
背景描述	MLTC-1細(xì)胞是從C57BL/6小鼠移植的M548OP Leydig細(xì)胞腫瘤中建立；MLTC-1細(xì)胞保留了原始腫瘤對(duì)激素的反應(yīng)。在人絨毛膜促性腺激素(hCG)、黃體激素、霍亂毒素、氟化鈉和脒基-5'-亞氨基二磷酸鹽處理下，MLTC-1細(xì)胞的膜腺苷酸環(huán)化酶活性提高；在hCG作用下，MLTC-1細(xì)胞還可生成黃體酮。
生物安全等級(jí)	1
生長(zhǎng)培養(yǎng)基	1640＋10% FBS＋1% P/S
推薦傳代比例	1:3-1:4
推薦換液頻率	2~3次/周
倍增時(shí)間	~35-40 hours
凍存條件	凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO溫度：液氮
培養(yǎng)條件	氣相：空氣，95%；CO2，5%溫度：37℃
致瘤性	Yes, in C57BL/6 mice.
受體表達(dá)情況	chorionic gonadotropin; luteinizing hormone (LH)
基因表達(dá)情況	progesterone
保藏機(jī)構(gòu)	ATCC; CRL-2065

 

細(xì)胞收到后處理：

細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)淖詈棉k法。收到細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后，先打開(kāi)外包裝，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作，培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)。鏡下觀察：未超過(guò)80%匯合度時(shí)，可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，加入6ml完全培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過(guò)80%匯合度時(shí)，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松）

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1、對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細(xì)胞，完全脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。

PS：若客戶收到2ml小管細(xì)胞，收到細(xì)胞后，用75%酒精噴灑整個(gè)管子消毒后放到超凈臺(tái)或安全柜內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作；將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右完全培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度：若密度未超過(guò)80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過(guò)80%，可直接進(jìn)行傳代（方法同上）。