一. 試劑盒說明
熒光素酶（Luciferase）是自然界中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶的統(tǒng)稱，其中最有代表性的是來自北美螢火蟲（Photinus pyralis）體內(nèi)的熒光素酶。螢火蟲熒光素酶屬于加氧酶（oxygenase），其發(fā)光反應(yīng)需要O2和Mg2+參與；有輔酶A（CoA）存在時(shí)能提高反應(yīng)效率，增加發(fā)光時(shí)間。螢火蟲熒光素酶無需翻譯后修飾，即可表現(xiàn)出熒光素酶活性。本產(chǎn)品將螢火蟲熒光素酶的基因插入慢病毒介導(dǎo)的載體中，通過CAG啟動(dòng)子過表達(dá)從而作為報(bào)告基因，在細(xì)胞中表達(dá)。常用于細(xì)胞標(biāo)記后小動(dòng)物細(xì)胞移植活體成像追蹤，從而評(píng)估移植后細(xì)胞的歸巢以及治療效果等。
二.試劑盒組份
| 組份 | Cat： | 儲(chǔ)存條件 |
| 螢光素酶標(biāo)記液 | 1 ml | 4 ℃ |
| polybrene | 8 μg/ml | 4℃ |
三. 注意事項(xiàng)
螢光素酶標(biāo)記液避免反復(fù)凍融，操作時(shí)要戴手套和口罩。該產(chǎn)品僅限于非臨床性科研使用。
四. 操作步驟
細(xì)胞傳代培養(yǎng)到6孔板或者6cm盤中12-16小時(shí)后，將螢光素酶標(biāo)記液0.3ml（6孔板）或者0.5ml（6cm盤）分別與新鮮細(xì)胞培養(yǎng)液混勻，比例為0.3ml螢光素酶標(biāo)記液中加入0.7ml新鮮培養(yǎng)液和1.0μl polybrene（終濃度8ng/ml），0.5ml螢光素酶標(biāo)記液中加入1.5ml新鮮培養(yǎng)液和2μl polybrean（終濃度8ng/ml）。預(yù)混好的螢光素酶標(biāo)記液加入到目的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，此時(shí)細(xì)胞密度不宜超過60%。2個(gè)小時(shí)之內(nèi)每間隔15-30min輕輕晃動(dòng)被標(biāo)記的細(xì)胞培養(yǎng)皿，可以達(dá)到更好的標(biāo)記效果，2小時(shí)之后培養(yǎng)皿中補(bǔ)充等體積的新鮮培養(yǎng)液，過夜培養(yǎng)后更換成新鮮培養(yǎng)液。48h之后，利用Progema公司生產(chǎn)的螢光素酶檢測(cè)試劑盒檢測(cè)標(biāo)記效果。
