一. 試劑盒說明
綠色熒光蛋白1962年在一種學(xué)名Aequoreavictoria的水母中發(fā)現(xiàn)。其基因所產(chǎn)生的蛋白質(zhì)，在藍色波長范圍的光線激發(fā)下，會發(fā)出綠色螢光。這個發(fā)光的過程中還需要冷光蛋白質(zhì)Aequorin的幫助，且這個冷光蛋白質(zhì)與鈣離子(Ca2+)可產(chǎn)生交互作用。本產(chǎn)品將綠色熒光蛋白的基因插入慢病毒介導(dǎo)的載體中，通過flap-Ub啟動子過表達從而作為報告基因，在細胞中表達。常用于細胞標記后移植追蹤，從而評估移植后細胞的歸巢以及治療效果等。
二.試劑盒組份
| 組份 | Cat： | 儲存條件 |
| 綠色熒光蛋白標記液 | 1 ml | 4 ℃ |
| polybrene | 8 μg/ml | 4℃ |
三. 注意事項
綠色熒光標記液避免反復(fù)凍融，操作時要戴手套和口罩。該產(chǎn)品僅限于非臨床性科研使用。
四. 操作步驟
細胞傳代培養(yǎng)到6孔板或者6cm盤中12-16小時后，將綠色熒光蛋白標記液0.3ml（6孔板一個孔中）或者0.5ml（6cm盤）分別與新鮮細胞培養(yǎng)液混勻，比例為0.3ml綠色熒光蛋白標記液中加入0.7ml新鮮培養(yǎng)液和1.0μl polybrene（終濃度8ng/ml），0.5ml綠色熒光蛋白標記液中加入1.5ml新鮮培養(yǎng)液和2μl polybrean（終濃度8ng/ml）。預(yù)混好的綠色熒光蛋白標記液加入到目的細胞培養(yǎng)皿中，此時細胞密度不宜超過60%。2個小時之內(nèi)每間隔15-30min輕輕晃動被標記的細胞培養(yǎng)皿，可以達到更好的標記效果，2小時之后培養(yǎng)皿中補充等體積的新鮮培養(yǎng)液，過夜培養(yǎng)后更換成新鮮培養(yǎng)液。48小時之后，在熒光顯微鏡下觀察標記綠色熒光效率。
