紅色熒光蛋白標(biāo)記試劑盒
一. 試劑盒說明
mCherry是一種來自于蘑菇珊瑚（mushroom coral）的紅色熒光蛋白，常有于標(biāo)記和示蹤某些分子和細(xì)胞組分。相對于其他熒光，mCherry的好處在于它的顏色和應(yīng)用最多的綠色熒光蛋白（GFP）能進(jìn)行共同標(biāo)記，并且mCherry相對于其他單體熒光蛋白來說也具有卓越的光穩(wěn)定型。本產(chǎn)品將紅色熒光蛋白的基因插入慢病毒介導(dǎo)的載體中，通過flap-Ub 啟動(dòng)子過表達(dá)從而作為報(bào)告基因，在細(xì)胞中表達(dá)。常用于細(xì)胞標(biāo)記后移植追蹤，從而評估移植后細(xì)胞的歸巢以及治療效果等。
二.試劑盒組份
| 組份 | Cat： | 儲(chǔ)存條件 |
| 紅色熒光蛋白標(biāo)記液 | 1 ml | 4 ℃ |
| polybrene | 8 μg/ml | 4℃ |
三. 注意事項(xiàng)
紅色熒光標(biāo)記液避免反復(fù)凍融，操作時(shí)要戴手套和口罩。該產(chǎn)品僅限于非臨床性科研使用。
四. 操作步驟
細(xì)胞傳代培養(yǎng)到6孔板或者6cm盤中12-16小時(shí)后，將紅色熒光蛋白標(biāo)記液0.3ml（6孔板一個(gè)孔中）或者0.5 ml（6cm盤）分別與新鮮細(xì)胞培養(yǎng)液混勻，比例為0.3ml紅色熒光蛋白標(biāo)記液中加入0.7ml新鮮培養(yǎng)液和1.0 μl polybrene（終濃度8ng/ml），0.5ml紅色熒光蛋白標(biāo)記液中加入1.5ml新鮮培養(yǎng)液和2 μl polybrean（終濃度8ng/ml）。預(yù)混好的紅色熒光蛋白標(biāo)記液加入到目的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，此時(shí)細(xì)胞密度不宜超過60%。2個(gè)小時(shí)之內(nèi)每間隔15-30min輕輕晃動(dòng)被標(biāo)記的細(xì)胞培養(yǎng)皿，可以達(dá)到更好的標(biāo)記效果，2小時(shí)之后培養(yǎng)皿中補(bǔ)充等體積的新鮮培養(yǎng)液，過夜培養(yǎng)后更換成新鮮培養(yǎng)液。48小時(shí)之后，在熒光顯微鏡下觀察標(biāo)記紅色熒光效率。
