廣義上來(lái)說(shuō)，凡是細(xì)胞培養(yǎng)體系中的外來(lái)成分或成分變化，都應(yīng)視為污染，細(xì)胞污染不能完全被消除，但能減少其發(fā)生的頻率和后果的嚴(yán)重性。細(xì)胞污染根據(jù)污染源主要可以分為物理性，化學(xué)性和生物性污染。
微生物污染
微生物污染的原因可分為2個(gè)階段：實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備階段和實(shí)驗(yàn)操作過程。準(zhǔn)備階段的原因包括：實(shí)驗(yàn)耗材滅菌不徹底；細(xì)胞房清潔度不夠，增加微生物污染風(fēng)險(xiǎn)；超凈臺(tái)潔凈度不夠，消毒不夠徹底，紫外線沒有預(yù)先照射足夠時(shí)間，表面沒有用酒精擦拭；沒有帶無(wú)菌乳膠手套；試劑本身已經(jīng)污染，沒有檢測(cè)出來(lái)。實(shí)驗(yàn)操作中的污染，往往是不夠嚴(yán)謹(jǐn)，粗心大意造成，如：手從無(wú)菌試劑的上方經(jīng)過；移液器操作不當(dāng)，液體接觸到移液器前端；移液管吸液過猛；吸頭忘記更換，導(dǎo)致交叉污染等。
不同的微生物污染物對(duì)細(xì)胞的影響也有差別，微生物中支原體和病毒對(duì)細(xì)胞形態(tài)和技能的影響是長(zhǎng)期的、緩慢的和潛在的。而霉菌和細(xì)菌增殖迅速，能在很短的時(shí)間內(nèi)抑制細(xì)胞生長(zhǎng)或產(chǎn)生毒素殺死細(xì)胞。
1）霉菌污染：種類很多，導(dǎo)致細(xì)胞污染的大多是曲霉菌、白色念珠菌、酵母菌、黑霉菌、孢子菌等。霉菌污染后多數(shù)在培養(yǎng)液中形成淡黃色或是白色的漂浮物，一般肉眼可見，較易被發(fā)現(xiàn)，短期內(nèi)培養(yǎng)液多不變混濁。倒置顯微鏡下可以看見細(xì)胞之間有縱橫交錯(cuò)穿行的絲狀，樹枝狀或管狀菌絲，并漂浮在培養(yǎng)液中。很多菌絲在高倍鏡下可以看見鏈狀排列的菌株。念珠菌及酵母菌菌株呈卵圓形，散在細(xì)胞上及細(xì)胞周邊生長(zhǎng)。處理：確認(rèn)是霉菌污染，如果細(xì)胞種類不是特別的珍貴，直接放棄，并將實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)徹底消毒。萬(wàn)不得已，可以嘗試抗霉菌素如兩性霉素B來(lái)清楚污染，實(shí)際操作中效果很難保證。
2）細(xì)菌污染：細(xì)菌污染較常見的有大腸桿菌，白色葡萄球菌，假單孢菌等。加用抗菌素的培養(yǎng)液可預(yù)防和排除個(gè)別一般少量細(xì)菌的污染。一旦發(fā)生細(xì)菌污染很容易發(fā)現(xiàn)，多數(shù)情況下培養(yǎng)液短時(shí)間內(nèi)變黃，表明有大量酸性物質(zhì)產(chǎn)生，出現(xiàn)明顯渾濁現(xiàn)象；有時(shí)靜置的培養(yǎng)液起初不混，但稍加震蕩，就有許多混濁物漂起。倒置顯微鏡下觀察，可見培養(yǎng)液中有大量圓球狀顆粒物漂浮，有時(shí)在細(xì)胞表面及周圍有大量細(xì)菌存在，細(xì)胞停止生長(zhǎng)并有中毒表現(xiàn)。必要時(shí)可取少量培養(yǎng)液涂片染色檢查以明確細(xì)菌種類；有的培養(yǎng)液改變不明顯而有疑似污染，亦可向肉湯培養(yǎng)基內(nèi)滴入少量培養(yǎng)液，37度培養(yǎng)以檢測(cè)。處理：一般用抗生素的常用量的5-10倍作沖擊療法，用藥24-48小時(shí)后再換常規(guī)培養(yǎng)液，有時(shí)在早期污染時(shí)此法有效。
3）支原體污染：支原體是一種大小介于細(xì)菌和病毒之間(最小直徑0.2um)并獨(dú)立生活的微生物，約有1%可通過濾菌器。支原體無(wú)細(xì)胞壁形態(tài)呈高度多形性，可為圓形、絲狀或梨形，在光境下不易看清內(nèi)部結(jié)構(gòu)。多數(shù)支原體適合于偏堿條件下生存(PH7．6—8．0)，對(duì)酸耐受性差，對(duì)熱比較敏感，對(duì)一般抗生素不敏感。支原體污染細(xì)胞后，培養(yǎng)液一般不發(fā)生混濁，多數(shù)情況下細(xì)胞病理變化輕微或不顯著，細(xì)微變化也可由于傳代、換液而緩解，因此易被忽視。但個(gè)別嚴(yán)重情況，可致細(xì)胞增殖緩慢，甚至從培養(yǎng)器皿脫落。如何確定是否有支原體污染，一般可用培養(yǎng)法或熒光染色法檢測(cè)，市場(chǎng)上有多種支原體檢測(cè)的試劑盒，本人試用過幾種，先達(dá)基因（gendx.cn）的ERA法支原體快速檢測(cè)試劑盒還不錯(cuò)，兩步操作，20min出結(jié)果，靈敏度較高、速度比較快、操作簡(jiǎn)單靈敏，可檢出的支原體覆蓋范圍非常比較廣，超過130（亞）種。
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