細(xì)胞名稱 | 人視網(wǎng)膜周細(xì)胞-永生化 |
貨號 | YS0878 |
種屬 | 人 |
組織來源 | 視網(wǎng)膜 |
永生化方法 | 轉(zhuǎn)入 Sv40 和 hTERT 基因 |
生長方式 | 貼壁 |
安全性 | 所有腫瘤和病毒轉(zhuǎn)染的細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護(hù) |
人視網(wǎng)膜周細(xì)胞培養(yǎng) | 培養(yǎng)基:DMEM 高糖+10%胎牛血清+1%雙抗 |
配套培養(yǎng)基:(YS-120) | |
溫度:37℃ | |
氣相:95%空氣,5%二氧化碳 | |
人視網(wǎng)膜周細(xì)胞傳代 | 收到細(xì)胞后,請對細(xì)胞培養(yǎng)瓶外表進(jìn)行消毒,將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行 1-2 小時的緩 |
沖,待細(xì)胞恢復(fù)基本生長狀態(tài)后,進(jìn)行后續(xù)細(xì)胞實驗。 | |
在倒置顯微鏡下觀察整個細(xì)胞生長情況: | |
(一)細(xì)胞未長至 85%時,用 75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到生物操作臺內(nèi),嚴(yán)格無 | |
菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶,若培養(yǎng)瓶上無特殊標(biāo)注,吸去剩余培養(yǎng)液,只留 6-8ml培 | |
養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。 | |
(二)細(xì)胞已長滿(達(dá) 85-95%)。即可進(jìn)行傳代,具體步驟如下: | |
1.棄去培養(yǎng)液,用 PBS 洗滌 1-2 次, | |
2.加入 1.0ml 胰酶消化液,37℃消化,顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞回縮變圓、 | |
透亮、輕拍甁壁呈流沙樣脫落,則迅速拿回操作臺,加入雙倍的含 10%血清的完全培 | |
養(yǎng)液,終止消化并輕輕吹打細(xì)胞,使其變成單細(xì)胞懸液, | |
3.將細(xì)胞收集于離心管中離心 1000rmp/5min,棄上清,輕彈管底,將細(xì)胞彈散, | |
4.加入新鮮培養(yǎng)液重懸細(xì)胞,進(jìn)行傳代、凍存, | |
5.如果沒有特別說明,建議收到細(xì)胞后的第一次傳代比例為 1:2。 | |
注:1.觀察細(xì)胞密度最好用(4X物鏡)低倍鏡觀察,以便正確的判斷細(xì)胞密度;觀 | |
察細(xì)胞形態(tài)請用(10X 或 20X)高倍鏡觀察; | |
2.瓶中運輸?shù)呐囵B(yǎng)液不能重復(fù)使用,請換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng); | |
3.有些細(xì)胞貼壁不牢,如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落,可離心重懸后接種到新瓶內(nèi); | |
4.收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、漏液及細(xì)胞污染,請及時與我們聯(lián)系。 | |
人視網(wǎng)膜周細(xì)胞保存 | 凍存條件:70%基礎(chǔ)培養(yǎng)液+20%胎牛血清+10%DMSO 保存條件:液氮存儲 |
供應(yīng)限制 | 僅供研究之用 |
常見問題 | 1.培養(yǎng)瓶有破裂,培養(yǎng)液有漏液:細(xì)胞極大可能會污染,所以我們會及時安排幫老師 |
及 | 解決。 2.細(xì)胞漂。号囵B(yǎng)瓶不開封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。1-2 小時后觀察,如細(xì)胞大部分又貼回瓶底,表明細(xì)胞活力正常,剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉,留 8-10ml 培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察,細(xì)胞生長至匯合度 85-95%,進(jìn)行消化傳代;如細(xì)胞還是不貼壁, 將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶,原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),中間注意觀察,我 們的技術(shù)人員會一直跟蹤指導(dǎo),直到問題解決。。 |
解決方案 | |