柱式病毒 DNAOUT是在一管式病毒 DNAOUT 的基礎(chǔ)上開發(fā)的、專門用于從血清(血漿)等液體樣品及拭子（咽拭子、鼻拭子、口腔拭子、陰道拭子等）中提取微量病毒DNA 的產(chǎn)品，
它具有下列特點：
1. 操作簡單，整個過程只需要 20 分鐘左右，不需要額外在洗柱液中補加乙醇。
2. 靈敏度高，通過 PCR 檢測到的最終靈敏度可以達到 30-50 拷貝/mL。
3. 安全無毒，不需要使用苯酚和氯仿等有機溶液。
4. 如果加上病毒離心富集步驟，最多可以處理 1.5 mL 液體病毒樣品。
5. 與 PCR 和熒光 PCR 兼容。
6. 價廉物美，性價比遠高于國外同類產(chǎn)品。
7. 適用于各種材料，包括血清、血漿、腦脊液、尿液、糞便、培養(yǎng)細胞上清液等無細胞材料。
1. 如果有 N 個樣品，標記 N+2 個 1.5-2 mL 螺旋蓋塑料離心管(如 Sarstedt，多出的一個為陽性對照，一個為陰性對照。為避免污染，建議不要使用壓蓋式塑料離心管。在每個管上做個標記，以在后續(xù)操作時區(qū)別向心面和離心面。然后在離心管中分別加入 0.2 mL 液體樣品（血清、血漿、尿液、腦脊液、唾液、眼淚等等），陽性對照和陰性對照。
1.1、 如果是口腔拭子、咽喉拭子等各種拭子樣品，則將拭子放入 0.2mL 自備生理鹽水中擠壓出液體，然后取 0.2mL 進行提取。
1.2、 如果是糞便等半固定樣品，則取約 0.3mL 的樣品，加入 0.3mL 自備生理鹽水，震蕩重懸，離心取 0.2mL 上清進行提取。
1.3、 如果血液，細胞培養(yǎng)液等含細胞的液體，可以離心用上清，也可以直接取用，但后者提取的病毒 DNA 中會有少量細胞的基因組 DNA 污染（但不影響 PCR）。血漿的抗凝劑必須是 EDTA 或 ACD，不能是肝素。使用ACD 時由于所加入 ACD 會增加體積，樣品會被稀釋，得到的病毒滴度會比使用 EDTA 低 15%左右。血漿最好按 0.6mL/管的量分裝保存，以避免反復(fù)凍融。
1.4、 如果樣品是實體組織或培養(yǎng)細胞，則需要在自備生理鹽水中勻漿后離心，用 0.2mL 上清液（含病毒）進行提取，但此種情況下最后得到的病毒DNA 不可避免的會含有少量基因組 DNA 污染（但不影響 PCR 檢測）。
1.5、 如果液體樣品中的病毒需要富集，可以使用 1.5 mL 上述方法得到的液體在 4℃ 24,000 g 冷凍離心 60 分鐘, 移棄 1.3 mL、用剩下的 0.2mL 繼續(xù)操作。
2. 加入 0.6 mL DNA 病毒裂解液到各離心管中，振蕩 30 秒混勻后室溫放置 10 分鐘裂解病毒。注意：DNA 病毒裂解液在 4℃放置后可能會產(chǎn)生沉淀，使用前必須放在 65℃水浴使沉淀徹底溶解并充分搖勻后再取用。
3. 加入 0.8mL 上柱結(jié)合液到離心管中，顛倒混勻后轉(zhuǎn)移一半的混合液（0.8mL）到離心吸附柱中，室溫放置 2 分鐘。
4. 12,000 rpm 室溫離心 1 分鐘，棄收集管中的穿透液，把離心吸附柱放回到收集管中。
5. 將剩余的另外一半裂解液（0.8mL）轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，室溫放置 2 分鐘。
6. 12,000 rpm 室溫離心 1 分鐘，棄收集管中的穿透液，把離心吸附柱放回到收集管中。
7. 加入 0.7 mL 通用洗柱液到離心吸附柱中，12,000 rmp 室溫離心 1 分鐘，棄收集管中的穿透液，把離心吸附柱放回到收集管中。
8. 加入 0.3 mL 通用洗柱液到離心吸附柱中，12,000 rmp 室溫離心 1 分鐘，棄收集管中的穿透液，把離心吸附柱放回到收集管中。此為第二次洗滌，可以跳過。
9. 12,000 rpm 室溫離心 1 分鐘（干甩），棄含穿透液的離心管。
10. 將干甩后的離心吸附柱套入到一個自備的 RNase-free 的 1.5 mL 離心管中，在離心吸附柱的濾膜的中部加入 30-100 uL DNA 洗脫液 3.0，然后室溫放置 2 分鐘。
11. 12,000 rpm 室溫離心 1 分鐘，離心管中的溶液即為病毒 DNA 溶液。
12. DNA 樣品可以直接用于 PCR，也可放-20℃長期保存。
注：病毒提取的核酸量遠不足以電泳檢測，提取后可通過 PCR 檢測，最終靈敏度可以達到 30-50 拷貝/mL。
Q：提取液體樣品/病毒核酸(RNA 或 DNA)為何很難？
A：原因一是量少。病毒顆粒中的 RNA 或 DNA 是作為遺傳物質(zhì)保存，每個病毒最多
只攜帶幾個拷貝(而一個細胞中有上萬種 RNA 分子，每種 RNA 有很多拷貝)，同時
其長度也十分有限(一般不到細胞基因組的萬分之一)，樣品中病毒數(shù)往往又不是很
多，使得樣品中病毒核酸的絕對量往往比一個細胞中核酸的絕對量還少，所以操
作中十分容易丟失。另外，由于得到的核酸絕對量很少，不能使用電泳和測 OD
檢測，只能通過 PCR 或 RT-PCR 檢測，而 PCR 或 RT-PCR 的條件又需要優(yōu)化，
所以要確定提取是否成功十分不容易。
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