產品特點
柱式糞便DNA提取試劑盒（柱式糞便DNAout）是動物糞便 DNAout（CAT#：70601）的柱式升級產品，專門用于從各種
動物糞便中快速提取高質量的 DNA。跟動物糞便 DNAout，它具有下列特點：
1. 操作更加簡單快速，一個樣品只需要十多分鐘的時間。
2. DNA 更加純凈，OD260/280 一般都在 1.8 以上，得到的 DNA 樣品原液或稀
釋液可以直接用于 PCR 擴增。
3. 每次微量提取可以處理 100-300mg 左右的樣品，能得到 5 ug 左右 DNA，片
段長度在 30 Kb 左右。
4. 可以同時提取到腸道上皮細胞和可能的腸道病原菌的 DNA。
5. 試劑無毒無害, 環(huán)保。
使用方法
1. 65℃預熱溶液 A，待其沉淀溶化后充分混勻，取 0.5 mL 加入到 1.5 mL 塑料
離心管中并放置于 65℃待用。
2. 稱取 0.1-0.3 g 的糞便，加入到含預熱溶液 A 的離心管中，震蕩器上劇烈震蕩
5-10 分鐘。如果是擴量操作，可以使用更多糞便和較大離心管。也可以將同一
種糞便在較大離心管中震蕩處理，然后再分到 1.5 mL 離心管中。注意:不論使
用大的還是小的離心管，一定要讓管底的糞便震蕩起來。
3. 將離心管置于 65℃水浴中保溫至少 5 分鐘。
4. 12000-15000 g 室溫離心 3 分鐘，將上清轉移到一新離心管中(上清液一般呈
淡黃色或深棕色，實際顏色隨樣品而異，上清液的體積一般為 300-400 µL)。
5. 在上清液中加入等體積的溶液 B，上下顛倒 30 秒充分混勻，溶液將呈白色或
淡黃色混濁狀。
6. 將離心管冰浴至少 5 分鐘。
7. 12000-15000 g 室溫離心 3 分鐘，轉移上清到新的 1.5 mL 離心管中，上清
液顏色將比第 4 步得到的上清的顏色稍淡，體積在 0.7 mL 左右。
注意：下面第 8-第 9 步的氯仿抽提操作可以省略，直接進入第 10 步，但 DNA 的
產量會低 50%左右，OD260/280 在 1.7-1.8。如果直接進入第 10 步，則轉移的
溶液體積不要超過 0.6 mL，否則沒有空間加溶液 C。
8. 加入 0.2 mL 的氯仿(自備)，震蕩器上充分振蕩 30 秒混勻。注意:一定要讓管底
的溶液震蕩起來。
9. 12000-15000 g 室溫離心 3 分鐘，小心轉移上清到新離心管中。說明：離心
后兩相交界面將有白色膜狀物，其中有機相部分顏色較深，一般呈淡棕色。將
0.5 mL 上清轉移到新的 1.5 mL 離心管中。如果有多余的可以棄之不用。
10. 加入 0.8 mL 的溶液 C，上下顛倒 30 秒混勻。
11. 分兩次上柱（即先轉移一半的混合液到離心吸附柱中，12000-15000 g 室溫
離心半分鐘，棄穿透液，然后再將剩下的混合液到離心吸附柱中，12000-15000
g 室溫離心半分鐘，棄穿透液）。
12. 加 0.7 mL 通用洗柱液到離心吸附柱中，12000-15000 g 室溫離心半分鐘，棄
穿透液。
13. 如果有必要，可以再加 0.3 mL 通用洗柱液到離心吸附柱中，12000-15000 g
室溫離心半分鐘，棄穿透液。增加一步洗滌能使最后得到的 DNA 的純度稍有
提高，但產量稍微有所降低。
14. 12000-15000 g 室溫再離心半分鐘。此步十分重要，否則殘留的通用洗柱液
會污染 DNA。
15. 將離心吸附柱轉移到一新的 1.5 mL 塑料離心管中，加入 50-100 uL DNA 洗
脫液 2.0。
16. 室溫放置離心吸附柱 1-2 分鐘。
17. 12000-15000 g 室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為 DNA 樣品，可以立即使
用或存放于冰箱待用。
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