產(chǎn)品及特點
用絕大多數(shù)文獻(xiàn)報道的方法從土壤或湖海沉積物中提取的 DNA 都含有棕黑色或黑色的腐殖酸的污染,用天澤基因的土壤 DNAOUT 從泥碳(腐殖酸含量超過 50%) 等腐殖酸豐富的土壤樣品中提取的 DNA 也有腐殖酸污染,它們往往對 PCR 等后續(xù)反應(yīng)有極大的抑制作用。本產(chǎn)品從天澤基因柱式 DNABACK 改進(jìn)而得,專門用于從土壤 DNA 樣品中清除腐殖酸污染。
1.去污染效果好,能使腐殖酸的濃度降低 10 倍以上。
2.DNA 回收率高,一般都在 80%以上。
3.操作過程簡單快速,只需要 10 分鐘。
4.擴(kuò)容性好,可小規(guī)模操作,也可以大規(guī)模操作。
5.處理后的樣品原液或稍微稀釋后即可用于 PCR。
運輸及保存:常溫運輸及保存,有效期一年。
自備試劑:無
使用方法
1.活化離心吸附柱:將 0.7 mL 吸附柱活化液加入到離心吸附柱中,套上套管后靜置 2 分鐘,室溫 13000 g 離心 1 分鐘,倒掉收集管中的液體。套上套管后再短暫離心半分鐘后倒棄穿透液。套上套管后待用。已經(jīng)活化的離心吸附柱最好當(dāng)天使用。
2.將 600 mL 專用上柱液與不超過 100 uL 的含腐殖酸的 DNA 溶液輕柔混勻。如果DNA 溶液體積超過 100 uL, 專用上柱液的體積需按 1:6 (DNA 溶液:專用上柱液) 的比例相應(yīng)增加。本試劑盒多提供了 7mL 上柱液供此情況下使用。如果需要更多上柱液,則需要另購。
3.將離心管中的溶液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中,套上收集管,放于離心管架上,靜置3-5 分鐘。
4.室溫 13000 g 離心 1 分鐘,倒掉收集管中的液體。若一次加不完,可分兩次加入并離心。
5.加入 0.5 mL 通用洗柱液于吸附柱中,13000 g 離心 1 分鐘,棄收集管中廢液。
6.重復(fù)上步洗滌操作 1 次。
7.13000 g 離心半分鐘以去除離心柱中的殘留液體(含乙醇)。
8.將離心柱置于一新的干凈的離心管(自備)中,加入 50 uL DNA 洗脫液 3.0, 并靜置 3-5 分鐘。
9.12000-15000 g 離心 1 分鐘,離心管底部所得溶液即為純化的 DNA 溶液,可立即用于后續(xù)實驗或者放冰箱長期保存。
圖注:從泥碳(腐殖酸含量大于60%)中提取的DNA用本產(chǎn)品處理前(B)和處理后(A)的 顏色對比。
處理前OD340為4.0(4為所用分光光度計的上限,實際讀數(shù)可能遠(yuǎn)高于4),處理后降低到0.3。處理前的原液、10倍和100倍稀釋液均無PCR擴(kuò)增,而處理后均可以擴(kuò)增。
Q:本產(chǎn)品與柱式DNABACK 有何區(qū)別?
A:本產(chǎn)品由柱式DNABACK 改進(jìn)而來,主要區(qū)別一是使用了不同的上柱液,減少了硅膠膜對DNA 的非特異吸附,更適用于微量DNA 樣品;二是上柱液中含有腐殖酸去除試劑,適合于土壤DNA 樣品。
Q:在用土壤DNA 進(jìn)行細(xì)菌專一性PCR 時,為何沒加DNA 模版的陰性對照有擴(kuò)增產(chǎn)物出現(xiàn)?
A:這是由于使用的 Taq DNA 聚合酶一般從 E.coli 表達(dá)菌株中提取,提取過程中污染了 E.coli 的基因組 DNA,而使用的廣譜細(xì)菌專一性引物可以識別所有細(xì)菌DNA 基因組DNA 模版,所以會產(chǎn)生擴(kuò)增。建議使用高質(zhì)量的Taq DNA 聚合酶。