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柱式Sephadex 探針純化試劑盒

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 柱式Sephadex 探針純化試劑盒是基于分子排阻層析原理的、專門用于純化同位素和非同位素標(biāo)記的核酸探針的試劑盒。在分子排阻層析過程中,大分子(標(biāo)記的核酸探針或Oligo 探針將繞過層析介質(zhì),快速穿透出層析柱,小分子(未參入的核苷酸將進(jìn)入層析介質(zhì)中,緩慢穿透出層析柱。根據(jù)這一時間差而將兩者分開。此過程的示意圖如下:

 

本產(chǎn)品具有下列特點:

1. 即開即用,提供純化所需要的所有溶液和介質(zhì),不需要單獨準(zhǔn)備每種試劑, 免去用戶自己摸索條件。

2. 適用于 PCR 標(biāo)記、隨機(jī)引物標(biāo)記、切口平移和填入法標(biāo)記。

3. 能去掉絕大部分的未標(biāo)記物、鹽離子等小分子。

4. 足夠 10 次純化使用,每次可以純化 50 uL 的標(biāo)記反應(yīng)液。

5. 可用于 DIG、生物素、Cy3、Cy5 等非同位素標(biāo)記的 DNA  RNA 探針

由于標(biāo)記分子帶非極性基團(tuán),容易進(jìn)入有機(jī)相,因此這些探針不能用傳  統(tǒng)的酚氯仿抽提-乙醇沉淀法純化。

 

成份

編號

10 次小紙盒包裝

Sephadex G50 介質(zhì)

121115A

15 mL

0.7 mL 離心柱及管套

121115B

10 套

TE 溶液

80934

10 mL

使用手冊

1 份

 

注意:由于非同位素標(biāo)記的探針濃度一般都比較低,非常容易吸附到槍頭或離心管的表面,造成探針的損失,因此最好使用硅化的離心管和槍頭。

1. 搖晃 Sephadex G50 介質(zhì)至均勻,迅速轉(zhuǎn)移 0.5 mL 到離心柱中,套上套管(又叫收集管。

2. 2000rpm 室溫離心 1 分鐘,Sephadex G50 介質(zhì)將壓緊在柱子里面。

3. 倒掉套管中的穿透液,再加 0.5mL 的搖晃后得到的 Sephadex G50 介質(zhì),2000rpm 室溫離心 1 分鐘。

4. 經(jīng)上述步驟會得到體積約為 0.5mL 壓緊后的 Sephadex G50 介質(zhì)。如不足,再加入少量的 G50 介質(zhì)離心,直到體積達(dá)到 0.5 mL 左右。倒掉套管中的穿透液。

5. 在柱子中 Sephadex G50 界面的上面加入 50 uL TE 緩沖液,套上套管, 2000rpm 室溫離心 1 分鐘,測量收集管中穿透液的體積。

6. 重復(fù)上步 3-5 次,直到收集管中穿透液的體積跟加入的體積一樣50 uL。

7.  50 uL 的標(biāo)記探針必須使用 50 uL 樣品。如果沒有 50 uL,需要用TE 緩沖液或水補足到 50 uL)加到柱子中 Sephadex G50 界面的上面, 套上一個自備的(最好是硅化的)離心管。

8. 2000rpm 室溫離心 1 分鐘,離心管中的穿透液將含標(biāo)記探針,未參入的標(biāo)記物將滯留在介質(zhì)中。

電泳或點雜交檢測探針回收效率后直接使用或放-20℃長期保存

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