本產(chǎn)品是基于熒光探針檢測的即用型PCR 試劑盒，可以對靶片段進行實時定量PCR 分析（quantitative PCR、qPCR）。產(chǎn)品含有經(jīng)過優(yōu)化的緩沖液組分、熱啟動 Taq DNA 聚合酶、Taq DNA 穩(wěn)定劑、dNTPs、MgCl2 和穩(wěn)定劑等所有實時定量PCR 所需要的成分，用戶只需加入基因組DNA 或cDNA 模板、引物和探針即可進行探針法實時定量PCR 反應，具有廣泛的用途。本產(chǎn)品具有下列特點：
1. 以2×Mix 提供，用戶只需準備模板、引物、探針和ROX 染料（取決于qPCR 儀器）即可以進行探針法實時定量PCR 實驗，非常方便快捷，降低了操作誤差。
2. 各成分的濃度和比例都經(jīng)過精心優(yōu)化，反應的靈敏度高，特異性強。靈敏度時可以達到50 拷貝/反應（跟模板質(zhì)量，引物設計等相關(guān)）。
3. 既可用于 TaqMan 探針 qPCR，也可以是分子信標（molecular beacon）探針 qPCR。
4. 靈敏度和專一性比染料法熒光定量PCR 更高。
5. 可用于基因表達分析、SNP 分析、拷貝數(shù)分析等實驗。也可以用于定性檢測。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研，1mL 足夠 100 次 20uL 體系的探針法 qPCR 反應。
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自備陽性對照模板（6 各梯度）
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不加
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各 1 uL（各 加 1 個梯度）
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不加
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陰性對照模板（一般用水）
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不加
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不加
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1 uL
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自備探針（0.5uM）
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各 1 uL
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各 1 uL
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1 uL
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自備 50×自備 ROX I 或 ROX II 染料（見注）
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各 0.4 uL
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各 0.4 uL
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0.4 uL
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補超純水到
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20 uL
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20 uL
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20 uL
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注，下列信息僅供參考，具體以 qPCR 儀器的使用手冊為準。 1、不需要 ROX 的機型：Agilent MX3000 和 MX4000、iCycler IQ、LightCycler 480、，、 Smart Cycler System、Thermal Cycler Dice Real Time System 等型號的熒光 PCR 儀器不需要加 ROX 染料，但加入的話也不會影響整個 PCR 分析。 2、需要使用 ROX I 的機型：ABI Prism7000、7300、7700、7900HT、Step One、 Step One Plus。 3、需要使用 ROX II 的機型：ABI Prism7500、7500 Fast、MJ Opticon、MJ Chromo4、 Corbett RotorGene 3000。 2. 放入熒光 PCR 儀中進行擴增, 下表的擴增參數(shù)僅供參考，一定需要根據(jù)靶分子長度，引物和探針的 Tm 值、標記染料的種類等進行調(diào)節(jié)。一般選擇三步法 PCR： 如果引物 Tm 值接近 60℃，也可以選擇兩步法 PCR： 3. 數(shù)據(jù)處理 如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標準曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標準曲線上推算出樣品 DNA 濃度的 log 值，再推算出其濃度。
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| 如果把2X 探針法qPCR Mix TaqMan探針法熒光定量PCR試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性。一般情況下，陰性對照 Ct 大于或等于 40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長，有典型擴增曲線，Ct 值應該小于或等于 30。對待測樣品，如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性，如果小于或等于 35 則為陽性。如果在 35-40 之間，則重復一次。重復實驗的 Ct 值如果大于或等于 40 則為陰性，如果小 于 40，則為陽性。
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染料法 qPCR MagicMix |
