Kinase-Lumi™超強型化學發(fā)光法激酶活性檢測試劑盒(Kinase-Lumi™ Max Luminescent Kinase Assay Kit)，是一種通過化學發(fā)光法測定激酶反應(yīng)后溶液中ATP的剩余量(最高可達200μM)來定量檢測激酶活性的試劑盒。本試劑盒也可用于檢測任何消耗ATP的酶，例如ATPase。
本試劑盒可以檢測反應(yīng)體系中濃度高達200μM的ATP，并在0-200μM范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。對于更低濃度的ATP可以選購檢測濃度上限為10μM的Kinase-Lumi™化學發(fā)光法激酶活性檢測試劑盒(Kinase-Lumi™ Luminescent Kinase Assay Kit)或上限為50μM的Kinase-Lumi™增強型化學發(fā)光法激酶活性檢測試劑盒(Kinase-Lumi™ Plus Luminescent Kinase Assay Kit)。另外兩個試劑盒分別在0-10μM和0-50μM范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。對于更高濃度的ATP需要適當稀釋后再進行檢測。
本試劑盒應(yīng)用范圍廣，適用于各類消耗ATP的激酶，包括以蛋白或多肽為底物的蛋白激酶和以糖、脂、醇等為底物的非蛋白激酶。本試劑盒也同樣適用于檢測消耗ATP的ATPase。
本試劑盒的檢測激酶活性的原理參考圖1。激酶在反應(yīng)過程中催化ATP上的磷酸基團轉(zhuǎn)移到底物的羥基上，從而使ATP轉(zhuǎn)變?yōu)锳DP，這樣就可以根據(jù)ATP的減少量來定量激酶的活性。借助ATP依賴的螢光素酶(也稱熒光素酶)催化的螢光素發(fā)光反應(yīng)，ATP可以通過測定化學發(fā)光來進行定量。這樣就可以通過設(shè)置ATP的標準曲線，來定量激酶反應(yīng)體系中的ATP剩余量，從而計算出ATP的消耗量，最終計算出激酶的活性。激酶的活性和ATP的剩余量成反比，即激酶活性越高，ATP剩余量越少，發(fā)光值越低；反之，激酶活性越低，ATP剩余量越多，發(fā)光值越高。
圖1. 本試劑盒檢測激酶活性的原理圖。
本試劑盒的使用非常便捷，對于待測樣品僅需加入等體積的檢測試劑即可完成檢測反應(yīng)，并且檢測反應(yīng)可以僅在一個孔內(nèi)完成。本試劑盒不僅適合少量樣品的檢測，也非常適合大量樣品的高通量篩選(high-throughput screening)檢測。
本試劑盒不僅操作特別方便，并且由于使用了熱穩(wěn)定的螢火蟲螢光素酶并對反應(yīng)體系進行了優(yōu)化，檢測體系的發(fā)光信號也非常穩(wěn)定。加入檢測試劑后10分鐘即可產(chǎn)生非常穩(wěn)定的化學發(fā)光，30分鐘內(nèi)化學發(fā)光的下降通常不會超過10%。
對于96孔板，我們推薦使用50μl激酶反應(yīng)體系和50μl的檢測試劑，總體積為100μl，此時本試劑盒可以進行200或2000次檢測。對于384孔板，我們推薦使用10μl激酶反應(yīng)體系和10μl的檢測試劑，總體積為20μl，此時本試劑盒可以進行1000或10000次檢測。也可以用其它體積，但激酶反應(yīng)體積和檢測試劑體積的比例必須為1:1。
包裝清單：
| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
| S0158S-1 | Kinase-Lumi™超強型化學發(fā)光法激酶活性檢測試劑 | 10ml |
| S0158S-2 | 0.5mM ATP | 0.2ml |
| — | 說明書 | 1份 |
保存條件：
-20℃保存，半年有效。-80℃保存，一年有效。檢測試劑需避光保存。
注意事項：
本試劑盒的檢測試劑中含有螢光素酶，反復凍融會導致其逐漸失活。為取得較好的使用效果，第一次解凍后可適當分裝，且分裝后的檢測試劑凍融次數(shù)不宜超過3次。反復凍融過程中，可能會導致檢測試劑中出現(xiàn)少量沉淀，此時宜平衡至室溫，并盡量溶解。如仍有殘留的不溶物，可以離心去除后使用，經(jīng)測試不會影響后續(xù)的檢測效果。
建議激酶或ATPase的反應(yīng)盡量在室溫(約25℃)進行，如果不是在室溫進行，需把樣品平衡至室溫才能用本試劑盒檢測。
試劑盒中提供的ATP僅足夠用于標準曲線的檢測，用于激酶反應(yīng)的ATP需自備。
檢測時需使用白色或黑色的96孔板或384孔板。如果使用普通透明的96孔板或384孔板，相鄰孔之間會產(chǎn)生相互干擾。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
