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生物素隨機(jī)引物DNA標(biāo)記試劑盒

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 生物素隨機(jī)引物DNA標(biāo)記試劑盒(Biotin Random Prime DNA Labeling Kit)是一種通過隨機(jī)引物標(biāo)記反應(yīng)產(chǎn)生生物素標(biāo)記DNA探針的試劑盒。本試劑盒標(biāo)記的生物素DNA探針可以用于常規(guī)的Northern、Southern、colony或plaque hybridization、dot或slot blot、原位雜交等。

在Klenow酶(Klenow fragment,3'-5'exo-)催化下,通過隨機(jī)引物標(biāo)記反應(yīng)(random prime labeling)可以把生物素標(biāo)記的Biotin-11-dUTP摻入到新合成的DNA探針中,這樣就可以產(chǎn)生生物素標(biāo)記的DNA探針。在隨機(jī)引物標(biāo)記反應(yīng)過程中,一些標(biāo)記好的DNA探針可以被Klenow酶從模板DNA鏈上驅(qū)趕下來。這樣在模板量較少的情況下,通過隨機(jī)引物標(biāo)記反應(yīng),最后可以產(chǎn)生比模板DNA量更多的生物素標(biāo)記DNA探針,可多達(dá)1-15倍左右。
本試劑盒可以用于多種DNA模板的標(biāo)記,包括DNA片段、線性化的質(zhì);騝osmid、超螺旋DNA等。用于本試劑盒的模板DNA片段應(yīng)不小于100bp,小于100bp的DNA模板可以使用生物素3'末端DNA標(biāo)記試劑盒(D3106)進(jìn)行DNA探針標(biāo)記。
用于本試劑盒的模板DNA的量應(yīng)不少于10ng,推薦的模板用量為100ng-1μg。
本試劑盒中提供了已經(jīng)用生物素標(biāo)記好的Biotin-Control DNA,可以用作檢測生物素DNA探針標(biāo)記效率的對照。
生物素標(biāo)記DNA可以使用化學(xué)發(fā)光法生物素標(biāo)記核酸檢測試劑盒(D3308)或其它適當(dāng)試劑盒進(jìn)行檢測。
本試劑盒可以用于10個(gè)標(biāo)記反應(yīng)。
包裝清單:

產(chǎn)品編號 產(chǎn)品名稱 包裝
D3118-1 Random Primer in Buffer(5X) 105μl
D3118-2 Klenow Fragment 11μl
D3118-3 Biotin-Labeling Mix 50μl
D3118-4 Ultrapure Water 1ml
D3118-5 Biotin-Control DNA(3ng/μl) 50μl
D3118-6 探針標(biāo)記終止液 100μl
說明書 1份

保存條件:
-20℃保存。
注意事項(xiàng):
需自備用于探針標(biāo)記效率檢測的相關(guān)試劑。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用說明:
1. 在一離心管或PCR管內(nèi)加入100ng-1μg DNA模板,再加入適量試劑盒提供的Ultrapure Water,至總體積為34μl。
說明:通常100-300ng DNA模板已經(jīng)足夠用于一次標(biāo)記反應(yīng)。
2. 加入10μl Random Primer in Buffer (5X),混勻。如有液滴沾在管壁上,高速離心數(shù)秒使所有液體集中在管底。
3. 沸水浴加熱5分鐘,或在PCR儀上100℃加熱5分鐘(如果不能設(shè)置100℃,99℃加熱5分鐘也完全可以)。
4. 立即放置到預(yù)先準(zhǔn)備好的冰水浴中至少2-3分鐘。
5. 加入5μl Biotin-Labeling Mix。
6. 加入1μl Klenow Fragment,混勻。如有液滴沾在管壁上,高速離心數(shù)秒使所有液體集中在管底。
7. 37℃孵育1小時(shí)或過夜(不宜超過20小時(shí))。37℃孵育過夜可以顯著增加生物素標(biāo)記DNA的產(chǎn)量,因此推薦孵育過夜(12-20)小時(shí)。
8. 加入3μl探針標(biāo)記終止液,混勻,終止標(biāo)記反應(yīng)。至此標(biāo)記反應(yīng)已經(jīng)全部完成,標(biāo)記好的DNA可以-20℃保存。
9. 此時(shí)探針可以直接用于探針標(biāo)記效率的檢測及Southern、Northern等后續(xù)操作。
10. 整個(gè)探針標(biāo)記反應(yīng)的流程參見下表:

100ng-1μgDNA模板 xμl
Ultrapure Water (34-x)μl
Random Primer in Buffer (5X) 10μl
100℃ 5分鐘,立即冰浴冷卻
Biotin-Labeling Mix 5μl
Klenow Fragment 1μl
總體積 50μl
37℃孵育過夜
探針標(biāo)記終止液 3μl
-20℃保存
此時(shí)可用于標(biāo)記效率的檢測及Southern、Northern等后續(xù)檢測

11. 探針標(biāo)記效率的檢測:可以對標(biāo)記好的探針進(jìn)行適當(dāng)梯度稀釋后,使用化學(xué)發(fā)光法生物素標(biāo)記核酸檢測試劑盒(D3308)或其它適當(dāng)?shù)姆椒ㄟM(jìn)行檢測。通常探針的標(biāo)記效率可以參考下表:

模板DNA量 生物素標(biāo)記DNA產(chǎn)量
孵育1小時(shí) 孵育20小時(shí)
10ng 80ng 900ng
30ng 150ng 1350ng
100ng 350ng 1650ng
300ng 750ng 2200ng
1000ng 1300ng 2600ng
3000ng 1600ng 2600ng

注意:具體的探針標(biāo)記效率還和模板DNA的長度、純度等因素有關(guān),上表的數(shù)值僅供參考。
12. 使用本試劑盒所獲得的生物素標(biāo)記DNA的長度通常在數(shù)百bp左右。具體的長度因模板的長度而有所不同。例如模板DNA的長度為1kb,則生物素標(biāo)記DNA產(chǎn)物的長度通常為100-1000bp,平均長度約為300bp左右。

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