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BL21(DE3)pLysS甘油菌(低本底蛋白誘導表達用)

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 BL21(DE3)pLysS甘油菌,是收集生長在對數(shù)期的BL21(DE3)pLysS菌,加入含有甘油的細菌凍存液制備而成?梢灾苯觿澠桨寤蛐×、大量培養(yǎng)。本菌株適用于T7啟動子(T7 promoter)調控目的基因表達的pET系列等原核表達質粒,特別適合于影響細菌生存和活力的外源毒性蛋白的IPTG誘導表達。

BL21缺失細胞質中的Lon蛋白酶(Lon protease)和胞外膜上的OmpT蛋白酶(OmpT protease),能有效避免重組表達蛋白的降解,所以被廣泛用作外源蛋白的表達菌株。

BL21(DE3)是BL21被λ噬菌體DE3溶原化(lysogenization)的衍生菌株,在lacUV5啟動子控制下可表達噬菌體T7 RNA聚合酶(相關基因序列已經(jīng)整合到細菌染色體中)。IPTG可以誘導BL21(DE3)菌株中T7 RNA聚合酶的高表達,因此BL21(DE3)菌株適合受T7啟動子(T7 promoter)調控的目的基因通過IPTG誘導表達。常見的pET系列原核表達載體中目的基因的表達都是受T7啟動子調控的,因此都適合用BL21(DE3)作為宿主菌。

BL21(DE3)pLysS菌株攜帶pLysS質粒,具有氯霉素抗性,可以表達能降解T7 RNA聚合酶的T7溶菌酶(T7 lysozyme),從而可以抑制T7 RNA聚合酶在目的蛋白被IPTG誘導前的本底表達,即導致本底性的外源重組蛋白的表達被有效抑制。因此本菌株特別適合于影響細胞生存和活力的外源毒性蛋白的表達。

BL21(DE3)pLysS菌株基因型:F- ompT hsdSB (rB- mB- ) gal dcm (DE3) pLysS (CamR)

BL21(DE3)pLysS菌株核酸酶表達水平較高,在利用其進行被轉化質粒提取時,為充分避免核酸酶的影響,可使用質粒小量抽提試劑盒(通用型) (D0007S或D0007M)、質粒中量抽提試劑盒(通用型) (D0020)或質粒大量抽提試劑盒(通用型) (D0028)進行質粒抽提。

本菌株可以使用常規(guī)的LB培養(yǎng)基或SOC培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。 包裝清單:

產(chǎn)品編號 產(chǎn)品名稱 包裝
D0339 BL21(DE3)pLysS甘油菌(低本底蛋白誘導表達用) 200μl
說明書 1份

保存條件:

-20℃保存,一年有效。-80℃可以長期保存。

注意事項:

使用本甘油菌時可以不必完全融解,在甘油菌表面蘸取少量涂板或進行液體培養(yǎng)即可。也可以完全融解后使用,但隨著凍融次數(shù)的增加細菌的活力會逐漸下降。在沒有結凍的情況下,菌體會逐漸沉淀至管底,請務必注意適當混勻后使用。

為保證菌種純正,避免其它細菌污染,盡量先劃平板然后再挑單克隆菌落進行后續(xù)操作。

本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。

為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

1. 劃平板接種:
取出BL21(DE3)甘油菌置于冰上,并置于超凈臺內,后續(xù)操作都在超凈臺內操作。
a. 用鑷子和塑料槍頭操作:鑷子的頂端在70%酒精中蘸一下,并且在酒精燈上略略燒一下,使鑷子的頂端處于無菌狀態(tài)。用鑷子夾取一個無菌的200µl塑料槍頭,蘸取少量BL21(DE3)pLysS甘油菌,然后把蘸有菌液的塑料槍頭,以盡量和LB平板(含有20µg/ml氯霉素)接近平行的角度,在LB平板上連續(xù)作S形或Z形劃動,再用一無菌的200µl塑料槍頭,在原先的劃線上以90°或120°角,再在LB平板上連續(xù)作S形或Z形劃動。通常換槍頭重復操作2-3次即可。37℃倒置培養(yǎng)過夜。
b. 用接種環(huán)操作:將接種環(huán)在酒精燈上略略燒一下,使接種環(huán)處于無菌狀態(tài)。微冷后,蘸取少量BL21(DE3)pLysS甘油菌,在LB平板(含有50µg/ml氯霉素)上連續(xù)作S形或Z形劃動。把接種環(huán)再燒一下,微冷后,在原先的劃線上以90°或120°角,再在LB平板上連續(xù)作S形或Z形劃動。通常用接種環(huán)重復操作2-3次即可。37℃倒置培養(yǎng)過夜。
2.直接培養(yǎng):
a.取出BL21(DE3)pLysS甘油菌置于冰上,并置于超凈臺內,后續(xù)操作都在超凈臺內操作。把鑷子的頂端在70%酒精中蘸一下,并且在酒精燈上略略燒一下,使鑷子的頂端處于無菌狀態(tài)。用鑷子夾取一個無菌的塑料槍頭或牙簽,蘸取少量BL21(DE3)pLysS甘油菌,然后把蘸有菌液的塑料槍頭或牙簽放到裝有3ml LB(含有20µg/ml氯霉素)的細菌培養(yǎng)試管內或裝有100ml或更大體積LB(含有20µg/ml氯霉素)的細菌培養(yǎng)瓶內。37℃,約200rpm培養(yǎng)過夜。
3.感受態(tài)細菌的制備
可以使用一步法感受態(tài)細菌制備試劑盒(D0301)、超級感受態(tài)細菌制備試劑盒(D0302)或其它方法進行感受態(tài)細胞

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