pLenti-H1是一種自行研發(fā)的使用特別便捷的用于表達(dá)小RNA并同時(shí)表達(dá)綠色熒光蛋白GFP的重組慢病毒載體。該載體可以用于表達(dá)siRNA (small interference RNA)，也稱RNAi (RNA interference)，或用于表達(dá)microRNA等其它小RNA。一方面，該載體可用于和pCMV-VSVG質(zhì)粒(D8215)及pCAG-dR8.9(delta8.9,Δ8.9)(D8216)共同轉(zhuǎn)染HEK-293T細(xì)胞以包裝慢病毒；另一方面，也可單獨(dú)用于直接轉(zhuǎn)染細(xì)胞，用于表達(dá)siRNA、miRNA等小RNA。
pLenti-H1含有H1啟動(dòng)子，適合驅(qū)動(dòng)小RNA的表達(dá)。同時(shí)pLenti-H1含有CMV啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)表達(dá)的綠色熒光蛋白基因GFP。直接轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞后或者包裝好的病毒感染哺乳動(dòng)物細(xì)胞后，CMV啟動(dòng)子能高效啟動(dòng)綠色熒光蛋白GFP的表達(dá)，可以方便地通過觀察綠色熒光來確定轉(zhuǎn)染或感染效率，從而來推測(cè)目的小RNA的表達(dá)情況。
慢病毒(Lentivirus)是以 HIV-1(人類免疫缺陷1型病毒)為基礎(chǔ)發(fā)展起來的病毒載體系統(tǒng)。它能高效的將目的基因(蛋白質(zhì)編碼序列或小RNA)導(dǎo)入動(dòng)物或人的原代細(xì)胞或細(xì)胞系。慢病毒的宿主范圍廣，對(duì)分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞均具有感染能力，可以將外源基因有效地整合到宿主染色體上，從而達(dá)到持久性表達(dá)。被廣泛應(yīng)用到各種細(xì)胞系的基因過表達(dá)、RNA干擾、microRNA研究以及活體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中。pLenti-H1作為慢病毒載體刪除了病毒絕大部分的致病基因，保留了包裝、逆轉(zhuǎn)錄和整合所需的 HIV-1順式作用序列長(zhǎng)末端重復(fù)序列（LTR），并對(duì)HIV的5’LTR進(jìn)行改造，換成CMV啟動(dòng)子，同時(shí)對(duì)3’LTR進(jìn)行了缺失突變,使病毒載體失去了自我復(fù)制能力，安全性大大提升。pLenti-H1中還加入了WRE元件，能夠顯著提高外源基因的表達(dá)。
pLenti-H1使用特別便捷，本載體通常僅須酶切1小時(shí)，無須酶切過夜，即可切膠回用于質(zhì)粒構(gòu)建。本載體由于BamH I和Xho I酶切位點(diǎn)之間預(yù)插入了一段長(zhǎng)1008 bp的片段，從而可以通過電泳來區(qū)分單酶切和雙酶切的片段，所以pLenti-H1用BamH I和Xho I通常雙酶切1小時(shí)即可電泳切膠回收目的片段用于后續(xù)的連接反應(yīng)，無需酶切過夜，這樣可以顯著縮短構(gòu)建質(zhì)粒所需的時(shí)間。目的小RNA的DNA序列合成并退火后可以直接連接入在BamH I和Xho I酶切位點(diǎn)之間。構(gòu)建好的能表達(dá)目的小RNA的pLenti-H1質(zhì)粒與慢病毒包裝質(zhì)粒pCMV-VSV-G(VSVG)(D8215)和pCAG-dR8.9(也稱為delta8.9或Δ8.9)(D8216)共同轉(zhuǎn)染到HEK-293T細(xì)胞中完成慢病毒的包裝，就可以制備獲得高滴度、自我復(fù)制缺陷并且能表達(dá)小RNA的重組慢病毒。
pLenti-H1為氨芐青霉素抗性。
pLenti-H1質(zhì)粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| CMV promoter | 254-817 |
| 5’LTR | 818-1016 |
| Psi | 1066-1203 |
| FLA P | 2447-2570 |
| H1 promoter | 2662-2759 |
| Inserted DNA fragment | 2766-3774 |
| Lox P | 3835-3868 |
| CMV | 3918-4520 |
| GFP | 4536-5254 |
| Lox P | 5275-5308 |
| WRE | 5364-5952 |
| 3’SIN-LTR | 6160-6662 |
| pUC | 6664-7337 |
| Ampr | 7482-8342 |
pLenti-H1質(zhì)粒(8475bp)的圖譜如下：
pLenti-H1插入片段附近的詳細(xì)圖譜見說明書：https://www.beyotime.com/Manual/D8202 pLenti-H1(慢病毒小RNA表達(dá)載體,綠色熒光).pdf
pLenti-H1中沒有的酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that do not cut pLenti-H1)包括：
| AscI | AvrII | BsiCI | BsiWI | BsmBI | Bst1107I | BstBI |
| BstEII | BstXI | Eco72I | HpaI | PmeI | PmlI | PspAI |
| RsrII | SfiI | SmaI | SphI | SplI | SrfI | StuI |
| Tth111I | XcaI | XcmI | XmaI |
pLenti-H1中的單酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that cut pLenti-H1 once)包括：
| MluI | A`CGCG,T | 232 | BlpI | GC`TNA,GC | 3727 |
| SpeI | A`CTAG,T | 253 | EspI | GC`TNA,GC | 3727 |
| BssHII | G`CGCG,C | 1093 | MscI | TGG|CCA | 3754 |
| SapI | GCTCTTC 8/11 | 1484 | PaeR7I | C`TCGA,G | 3776 |
| FseI | GG,CCGG`CC | 1532 | XhoI | C`TCGA,G | 3776 |
| EcoNI | CCTNN`N,NNAGG | 1554 | BspMI | ACCTGC 10/14 | 3810 |
| BsmI | GAATG,C 7 | 1978 | NotI | GC`GGCC,GC | 3891 |
| PstI | C,TGCA`G | 2421 | NsiI | A,TGCA`T | 3923 |
| XbaI | T`CTAG,A | 2617 | NheI | G`CTAG,C | 4515 |
| BamHI | G`GATC,C | 2761 | AgeI | A`CCGG,T | 4524 |
| BsaBI | GATNN|NNATC | 3220 | PflMI | CCAN,NNN`NTGG | 5606 |
| BclI | T`GATC,A | 3353 | SacII | CC,GC`GG | 5868 |
| Bsu36I | CC`TNA,GG | 6087 | BspMII | T`CCGG,A | 6469 |
| Acc65I | G`GTAC,C | 6091 | DrdI | GACNN,NN`NNGTC | 6771 |
| Asp718 | G`GTAC,C | 6091 | AhdI | GACNN,N`NNGTC | 7556 |
| KpnI | G,GTAC`C | 6095 | SspI | AAT|ATT | 8360 |
pLenti-H1質(zhì)粒中推薦使用的測(cè)序引物序列如下：
H1 primer (2678–2697): 5´TCGCTATGTGTTCTGGGAAA 3´
pLenti-H1的全序列信息：pLenti-H1序列信息.txt
包裝清單：
| 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
| D8202-1µg | pLenti-H1 | 1µg |
| D8202-100µg | pLenti-H1 | 100µg |
| — | 說明書 | 1份 |
保存條件：
-20℃保存。
注意事項(xiàng)：
本質(zhì)粒未經(jīng)書面許可不得用于任何商業(yè)用途，也不得移交給訂貨人所在實(shí)驗(yàn)室外的任何個(gè)人或單位。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
