生產(chǎn)的一步法感受態(tài)細(xì)菌制備試劑盒(One Step Competent Cell Preparation Kit) 是一種用于大腸桿菌感受態(tài)細(xì)菌快速制備的試劑盒。一步法感受態(tài)細(xì)菌制備試劑盒是在經(jīng)典的TSS法的基礎(chǔ)上進(jìn)行適當(dāng)改良而成，既繼承了TSS法的快速和簡(jiǎn)便，又在此基礎(chǔ)上提高了感受態(tài)細(xì)菌的轉(zhuǎn)化效率和易操作性。使用本試劑盒可以使感受態(tài)效率達(dá)到106以上。不僅可以轉(zhuǎn)化質(zhì)粒，而且可以轉(zhuǎn)化普通的連接產(chǎn)物。另外，對(duì)細(xì)菌的培養(yǎng)條件要求比較寬松，培養(yǎng)的細(xì)菌只要處于對(duì)數(shù)期內(nèi)就可以使用本試劑盒制備感受態(tài)細(xì)菌。

使用本試劑盒操作非常簡(jiǎn)單，細(xì)菌培養(yǎng)好后僅需十幾分鐘就可以完成感受態(tài)細(xì)菌的制備。
本試劑盒適用于絕大部分常見的大腸桿菌，包括DH5α、JM109、TG1、HB101和XL-1等。對(duì)于一些用于蛋白表達(dá)或病毒質(zhì)粒構(gòu)建的特殊大腸桿菌也適用，制備出來的感受態(tài)菌轉(zhuǎn)化質(zhì)粒肯定沒有問題，但如果轉(zhuǎn)化連接產(chǎn)物有時(shí)效果不如DH5α等其它常見的細(xì)菌。
本試劑盒提供了DH5α甘油菌作為菌種，可以用于制備感受態(tài)細(xì)菌。
本試劑盒可以分多次使用，共可以制備足夠進(jìn)行200-400次轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)菌。
包裝清單：

保存條件：
-20℃保存，一年有效。
注意事項(xiàng)：
需自行配制LB液體培養(yǎng)基和LB平板以用于細(xì)菌的培養(yǎng)和感受態(tài)效率的檢測(cè)。
盡管經(jīng)過我們的測(cè)試凡是處于對(duì)數(shù)期內(nèi)的細(xì)菌都可以用于感受態(tài)細(xì)菌的制備，但如果細(xì)菌生長(zhǎng)的OD600的值達(dá)到0.3-0.5左右時(shí)，制備出來的感受態(tài)效果最佳。
在制備感受態(tài)細(xì)菌的過程中均使用不含抗生素的LB。在使用感受態(tài)菌的過程中熱休克后的37℃培養(yǎng)時(shí)也必須使用無抗生素的LB，即便轉(zhuǎn)入的質(zhì)粒是有抗性的。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用說明：
1. 涂平板：
為取得最佳的感受態(tài)效率，必須先把甘油菌或其它形式保存的菌種涂LB平板，并培養(yǎng)過夜。
2. 接種：
取一有新鮮培養(yǎng)的菌種的LB平板，后續(xù)操作均在超凈臺(tái)內(nèi)進(jìn)行。把鑷子的頂端在70%酒精中蘸一下，并在酒精燈上略略燒一下，使鑷子的頂端處于無菌狀態(tài)。用鑷子夾取一個(gè)無菌的塑料槍頭或牙簽，從平板上挑取一個(gè)單克隆，然后把蘸有菌種的塑料槍頭或牙簽放到裝有3毫升LB的細(xì)菌培養(yǎng)試管內(nèi)。上述操作也可以使用接種環(huán)等進(jìn)行操作。
3. 培養(yǎng)：
37℃約200rpm培養(yǎng)過夜，通常培養(yǎng)時(shí)間控制在16小時(shí)左右為宜。絕對(duì)不宜超過18小時(shí)。
4. 再接種培養(yǎng)：
根據(jù)需要制備的感受態(tài)細(xì)菌的量，按照1:100的比例用新鮮培養(yǎng)的過夜菌接種培養(yǎng)。例如取500微升的新鮮過夜菌到50毫升的LB中繼續(xù)37℃約200rpm培養(yǎng)。通常在大約培養(yǎng)2-2.5小時(shí)后OD600可以達(dá)到0.3-0.5。
5. 制備感受態(tài)細(xì)菌：
在培養(yǎng)的細(xì)菌OD600達(dá)到0.3-0.5時(shí)，4℃2000g離心5分鐘收集細(xì)菌。 如果離心沉淀前的菌量為50毫升，按后續(xù)操作進(jìn)行，如果是其它體積則按比例換算后進(jìn)行后續(xù)操作。用5毫升預(yù)冷的LB重新懸浮起細(xì)菌沉淀，加入5毫升在冰浴或冰水浴上融解的感受態(tài)制備試劑，混勻，冰浴放置5分鐘。然后再輕輕混勻，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)分裝到1.5毫升或0.5毫升的離心管內(nèi)后-70℃保存。
注：如果以后會(huì)只做單管的轉(zhuǎn)化，可以分裝成每管最少50微升或100微升，如果以后一次性做多個(gè)轉(zhuǎn)化，可以每管分裝500微升或更大體積。-70℃保存后，感受態(tài)的效率會(huì)隨時(shí)間的推移逐漸下降，但通常在半年內(nèi)使用轉(zhuǎn)化效率下降不會(huì)太多�？偟膩碚f，新鮮制備的感受態(tài)要比凍存的感受態(tài)轉(zhuǎn)化效率更高一些。
6. 感受態(tài)細(xì)菌的使用：
a.對(duì)于感受態(tài)細(xì)菌效率的測(cè)定或連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化(其它如基因突變產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化等參考連接產(chǎn)物進(jìn)行)：
(a)在冰上緩慢融解感受態(tài)細(xì)菌(對(duì)于新鮮制備的感受態(tài)就可以直接使用了)，如果檢測(cè)感受態(tài)細(xì)菌的效率，加入100pg-10ng質(zhì)粒，但質(zhì)粒的體積不宜超過感受態(tài)細(xì)菌量的10%。如果轉(zhuǎn)化連接產(chǎn)物，每100微升感受態(tài)細(xì)菌加入10微升連接產(chǎn)物。
(b)輕輕用手指彈動(dòng)離心管，以混勻細(xì)菌和質(zhì)�；蜻B接產(chǎn)物。冰浴或冰水浴放置30分鐘。
(c)42℃水浴，熱休克2分鐘。
(d)熱休克后立即置于冰水浴中，2分鐘。
(e)加入900微升LB，37℃200rpm培養(yǎng)1小時(shí)。
(f)如果檢測(cè)感受態(tài)效率，取100微升涂布到含有相應(yīng)抗生素的LB平板上。如果轉(zhuǎn)化的是連接產(chǎn)物，2000-3000g離心1分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間使細(xì)菌充分沉淀下來。去除約900-950微升LB培養(yǎng)液。細(xì)菌沉淀用余下的LB培養(yǎng)液重懸，然后全部涂布到含有適當(dāng)抗生素的LB平板上。37℃培養(yǎng)過夜。
b.對(duì)于質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化：
(a)融解感受態(tài)細(xì)菌，加入不少于50ng質(zhì)粒到50或100微升感受態(tài)細(xì)菌中。質(zhì)粒的量可以是1微克或更多，但體積不宜超過感受態(tài)細(xì)菌量的10%。
(b)輕輕用手指彈動(dòng)離心管，以混勻細(xì)菌和質(zhì)粒。冰浴或冰水浴放置10分鐘。
(c)取全部菌液直接涂布到含有適當(dāng)抗生素的LB平板上，37℃培養(yǎng)過夜。
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