Lyso-Tracker Red是一種溶酶體(lysosome)紅色熒光探針,能通透細胞膜,可以用于活細胞溶酶體特異性熒光染色。
Lyso-Tracker Red為采用Molecular Probes公司的DND-99進行了熒光標記的帶有弱堿性的熒光探針,其中僅弱堿可部分提供質(zhì)子,以維持pH在中性,可以選擇性地滯留在偏酸性的溶酶體中,從而實現(xiàn)對于溶酶體的特異性熒光標記。中性紅(Neutral Red)和吖啶橙(Acridine Orange)也都可以對溶酶體進行熒光染色,但中性紅和吖啶橙的染色缺乏特異性。Lyso-Tracker Red適用于活細胞溶酶體的熒光染色,但不適合用于固定細胞溶酶體的熒光染色。Lyso-Tracker Red分子的化學結(jié)構(gòu)式參考圖1。
圖1.Lyso-Tracker Red的化學結(jié)構(gòu)式。Lyso-Tracker Red的分子式為C20H24BF2N5O,分子量為399.25,最大激發(fā)波長為577nm,最大發(fā)射波長為590nm。Lyso-Tracker Red的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜參考圖2。
圖2.Lyso-Tracker Red的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜。Lyso-Tracker Red是嗜酸性熒光探針,用于活細胞內(nèi)酸性細胞器的標記和示蹤。這些探針具有幾個重要特征,包括高度選擇靶向酸性細胞器和在納摩爾濃度有效標記活細胞。Lyso-Tracker Red必須在極低濃度(通常約50nM)下才能獲得優(yōu)異的選擇性。這些探針的滯留(retention)機制雖然沒有被研究清楚,但很可能與酸性細胞器的質(zhì)子化和滯留性有關(guān),Lyso-Tracker Red探針的內(nèi)吞作用動力學研究顯示染料進入活細胞的攝入時間僅幾秒即可。然而,這些溶酶體探針會導致溶酶體被堿化,長期孵育會誘使溶酶體pH值的增加。因此,建議成像前用探針孵育細胞的時間不能太久。Lyso-Tracker Red探針具體使用濃度和孵育時間需要根據(jù)自身實驗條件和具體細胞種類來進行摸索以達到滿意的染色效果。Lyso-Tracker Red在活細胞中染色效果參考圖3。
圖3.Lyso-Tracker Red在HeLa細胞中的染色效果。Hoechst 33342染色的HeLa細胞其細胞核呈現(xiàn)藍色熒光;Lyso-Tracker Red染色HeLa細胞的溶酶體,呈現(xiàn)紅色熒光。
Lyso-Tracker Red適用于活細胞溶酶體的熒光染色,但不適合用于固定細胞溶酶體的熒光染色。如果經(jīng)Lyso-Tracker Red染色后的細胞需要進行固定操作,可以嘗試3%的戊二醛(glutaraldehyde)。
按照1:20000的比例稀釋,可以配制1000ml Lyso-Tracker Red工作液。
包裝清單:
產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
C1046 | Lyso-Tracker Red (1mM) | 50µl |
- | 說明書 | 1份 |
保存條件:
-20℃避光保存,半年有效。
注意事項:
Lyso-Tracker Red (1mM)在4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內(nèi),可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。對于微量的液體,每次使用前先離心數(shù)秒鐘,使液體充分沉降到管底。
熒光染料均存在淬滅問題,請盡量注意避光,以減緩熒光淬滅。
Lyso-Tracker Red適用于活細胞溶酶體熒光染色,但不適合用于固定細胞溶酶體的熒光染色。如果經(jīng)Lyso-Tracker Red染色后的細胞需要進行固定操作,可以嘗試3%的戊二醛(glutaraldehyde)。
需自備蓋玻片和載玻片(可以向雅吉生物訂購)。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用說明:
1.Lyso-Tracker Red工作液的配制:
a.取少量Lyso-Tracker Red按照1:13333-1:20000的比例加入到細胞培養(yǎng)液或適當?shù)娜芤?例如含鈣鎂離子的HBSS)中,使最終濃度為50-75nM。例如取1µl Lyso-Tracker Red加入到20ml或13.33ml細胞培養(yǎng)液或適當?shù)娜芤?例如含鈣鎂離子的HBSS)中。混勻后即為Lyso-Tracker Red工作液。HBSS with Ca2+ & Mg2+ (C0219)可以向雅吉生物訂購。
b.Lyso-Tracker Red工作液使用前需37℃預溫育。
注:工作液中Lyso-Tracker Red的濃度可以根據(jù)實際情況進行適當調(diào)整。為降低背景,在染色效果可以接受的范圍內(nèi),建議盡量使用較低濃度的Lyso-Tracker Red。
2.溶酶體的熒光標記:
a.去除細胞培養(yǎng)液,加入步驟1配制好的并37℃預溫育的Lyso-Tracker Red染色工作液,與細胞37℃共孵育5-60分鐘。
b.去除Lyso-Tracker Red染色工作液,加入新鮮的細胞培養(yǎng)液。
c.隨后通常用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡進行觀察。此時可觀察到溶酶體呈明亮的強熒光染色。如果染色效果欠佳,可以提高Lyso-Tracker Red染色工作液中Lyso-Tracker Red的濃度或在推薦的時間范圍內(nèi)適當延長染色時間。