溶酶體β-半乳糖苷酶染色試劑盒(Lysosomal β-Galactosidase Staining Kit)是一種對(duì)溶酶體中酸性β-半乳糖苷酶(Acid β-Galactosidase)進(jìn)行染色檢測(cè)的試劑盒，常用作細(xì)胞衰老檢測(cè)時(shí)的對(duì)照。在普通的光學(xué)顯微鏡下就可以觀測(cè)到細(xì)胞或組織中溶酶體酸性β-半乳糖苷酶的活力水平情況。本試劑盒可以用于培養(yǎng)細(xì)胞的檢測(cè)，也可以用于組織切片的檢測(cè)。

絕大多數(shù)正常細(xì)胞都可以檢測(cè)到較高水平的溶酶體β-半乳糖苷酶活性水平。可以用作細(xì)胞衰老β-半乳糖苷酶染色時(shí)的參考染色。細(xì)胞衰老特異的β-半乳糖苷酶僅在衰老時(shí)表達(dá)，而溶酶體β-半乳糖苷酶幾乎在任何情況下都表達(dá)。
溶酶體β-半乳糖苷酶染色試劑盒，以X-Gal為底物，在溶酶體酸性β-半乳糖苷酶的催化下會(huì)生成深藍(lán)色產(chǎn)物。從而在光學(xué)顯微鏡下很容易觀察到變成藍(lán)色的表達(dá)β-半乳糖苷酶的細(xì)胞或組織。本產(chǎn)品染色后的HeLa細(xì)胞請(qǐng)參考圖1。

圖1. HeLa細(xì)胞使用本產(chǎn)品染色后的示例圖片。

本試劑盒僅染色溶酶體酸性β-半乳糖苷酶，不會(huì)染色衰老特異性的β-半乳糖苷酶，也不會(huì)染色外源轉(zhuǎn)染表達(dá)的用于報(bào)告基因的β-半乳糖苷酶(大腸桿菌的β-半乳糖苷酶)。
主要特點(diǎn)：本試劑盒經(jīng)過(guò)多方面的優(yōu)化，是同類產(chǎn)品中首創(chuàng)的能兼容普通的細(xì)胞培養(yǎng)用多孔板、移液管等聚苯乙烯類材質(zhì)耗材或容器的試劑盒。本試劑盒可以有效避免由于和多孔板、移液管等的不兼容導(dǎo)致的染色偏弱、染色效果不穩(wěn)定等情況。通常同類試劑盒要求使用可高溫高壓滅菌的聚丙烯(polypropylene)材質(zhì)的耗材、容器或玻璃容器進(jìn)行溶液的配制，而不能使用普通的多孔板、移液管等聚苯乙烯(polystyrene)類材質(zhì)的容器或耗材，否則可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀，影響實(shí)驗(yàn)觀察。即使嚴(yán)格按照要求操作，也會(huì)在染色時(shí)間比較長(zhǎng)的情況下，容易出現(xiàn)絮狀物沉淀(參考圖2)。本試劑盒經(jīng)過(guò)多方面的優(yōu)化，對(duì)耗材或容器的材質(zhì)無(wú)特殊要求，可以兼容普通的多孔板和移液管等常用耗材和容器。而且配制的工作液不會(huì)產(chǎn)生沉淀或不溶物，使用更加便捷。

圖2. 本試劑盒優(yōu)化前后的對(duì)比圖。優(yōu)化前，X-Gal溶液直接接觸聚苯乙烯類材質(zhì)的材料如移液管、多孔板等會(huì)產(chǎn)生明顯的腐蝕(A圖)，使用聚苯乙烯容器配制染色工作液后，在顯微鏡下觀察有異常的絮狀不溶物(C圖)；優(yōu)化后，X-Gal溶液直接接觸聚苯乙烯類材質(zhì)的材料觀察不到有任何異常情況(B圖)，使用聚苯乙烯容器配制染色工作液后，在顯微鏡下觀察也沒(méi)有任何異常情況(D圖)。

如果使用6孔板檢測(cè)，足夠測(cè)定100個(gè)樣品；使用24孔板測(cè)定，足夠測(cè)定400個(gè)樣品；使用96孔板測(cè)定，足夠測(cè)定1000個(gè)樣品。對(duì)于組織切片或組織塊，可以檢測(cè)的樣品數(shù)量視樣品的大小而定。對(duì)于普通切片的滴染足夠檢測(cè)100個(gè)樣品。
包裝清單：

保存條件：
-20℃保存，一年有效。其中X-Gal溶液需避光保存。
注意事項(xiàng)：
β-半乳糖苷酶染色固定液對(duì)人體有毒、有腐蝕性，操作時(shí)請(qǐng)?zhí)貏e小心，并注意有效防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。
X-Gal溶液在-20ºC或4ºC保存會(huì)凍結(jié)，室溫或37ºC水浴2-5分鐘并適當(dāng)搖動(dòng)即可完全融解。
β-半乳糖苷酶染色液B在剛剛?cè)芙夂髸?huì)觀察到有沉淀，屬正�，F(xiàn)象，充分混勻或Vortex后，沉淀會(huì)全部溶解。作為常規(guī)，試劑使用前必須確保沉淀全部溶解，并且混勻。
使用96孔板等多孔板進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，如果孵育過(guò)夜容易產(chǎn)生所謂的“邊緣效應(yīng)”(edge effect)，即多孔板四周的孔由于和外界最直接接觸，易受外界環(huán)境影響，其中最明顯的是四周細(xì)胞培養(yǎng)孔的蒸發(fā)效應(yīng)。邊緣效應(yīng)會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)不均勻、細(xì)胞分布不均一、培養(yǎng)液體積不一致、培養(yǎng)液中相關(guān)成分的濃度、pH值不一致。建議采取以下方法避免96孔板等多孔板的邊緣效應(yīng)：避免孵育過(guò)長(zhǎng)時(shí)間，以避免蒸發(fā)等帶來(lái)的邊緣效應(yīng)；棄用邊緣孔并在棄用的邊緣孔中加入等量的水、PBS或其他適當(dāng)溶液；在多孔板非孔的凹陷處加入適量的水或其他適當(dāng)溶液；將整塊板放在濕盒中；使用防揮發(fā)蓋；在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)，實(shí)驗(yàn)樣品最好進(jìn)行隨機(jī)分配，不要將某一組樣品固定放在某個(gè)位置而引入可能的系統(tǒng)性誤差。
需自備PBS或HBSS(Hanks Balanced Salt Solution)。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用說(shuō)明：
1. 對(duì)于貼壁細(xì)胞：
a. 對(duì)于6孔板中培養(yǎng)的細(xì)胞，吸除細(xì)胞培養(yǎng)液，用PBS或HBSS洗滌1次，加入1毫升β-半乳糖苷酶染色固定液，室溫固定15分鐘。對(duì)于其它類型的培養(yǎng)板，固定液及后續(xù)溶液的用量參照此比例進(jìn)行操作。
b. 吸除細(xì)胞固定液，用PBS或HBSS洗滌細(xì)胞3次，每次3分鐘。
c. 吸除PBS或HBSS，每孔加入1毫升染色工作液。染色工作液的配制方法參考表1。
表1. 染色工作液的配制方法。

d. 37℃孵育過(guò)夜，可以用parafilm或保鮮膜封住6孔板防止蒸發(fā)。
e. 普通光學(xué)顯微鏡下觀察。如不能及時(shí)觀察計(jì)數(shù)，可以去除染色工作液，加入2毫升PBS，4℃可以保存數(shù)天；或者加上封片液封片后，4℃可以保存較長(zhǎng)時(shí)間。
2. 對(duì)于懸浮細(xì)胞：
a. 離心收集細(xì)胞至1.5ml離心管內(nèi)，用PBS或HBSS洗滌1次，加入1毫升β-半乳糖苷酶染色固定液，室溫固定15分鐘。固定時(shí)可以在搖床上緩慢搖動(dòng)，以避免細(xì)胞結(jié)成團(tuán)塊。
b. 離心，吸除細(xì)胞固定液，用PBS或HBSS洗滌細(xì)胞3次，每次3分鐘。
c. 離心，吸除PBS或HBSS，每管加入0.5-1毫升染色工作液。染色工作液的配制方法參考表1。
d. 37℃孵育過(guò)夜。
e. 取部分染色后的細(xì)胞，滴加到載玻片上或6孔板內(nèi)，普通光學(xué)顯微鏡下觀察。如不能及時(shí)觀察計(jì)數(shù)，可以離心，去除染色工作液，然后加入1毫升PBS，4℃可以保存數(shù)天。如果離心，取細(xì)胞用于涂片，加上封片液封片后，4℃可以保存較長(zhǎng)時(shí)間。
3. 對(duì)于組織切片：
a. 對(duì)于石蠟切片先按照常規(guī)方法進(jìn)行脫蠟和水化處理。對(duì)于冷凍切片直接按照以下步驟進(jìn)行。
b. 加入適當(dāng)體積的β-半乳糖苷酶染色固定液，以充分蓋住組織為宜，室溫固定不少于15分鐘。
c. 用PBS浸泡洗滌組織3次，每次不少于5分鐘。
d. 吸除PBS，加入適當(dāng)量的染色工作液。染色工作液的配制方法參考表1。
e. 37℃孵育過(guò)夜，可以用parafilm或保鮮膜封住防止蒸發(fā)。最好把整個(gè)切片浸泡在染色工作液中。
f. 普通光學(xué)顯微鏡下觀察。如不能及時(shí)觀察，加上封片液封片后4℃可以保存較長(zhǎng)時(shí)間

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