生產(chǎn)的YO-PRO-1/RNase細(xì)胞核染色液 (YO-PRO-1/RNase Staining Solution for Nucleus)，簡稱YP1/RNase細(xì)胞核染色液，是一種使用DNA綠色熒光染料YO-PRO-1 (YP1)在死細(xì)胞或經(jīng)過通透處理的細(xì)胞中染色細(xì)胞核的染色液。本染色液染色后可以用于熒光顯微鏡、流式細(xì)胞儀、熒光酶標(biāo)儀等熒光檢測。
YO-PRO-1，又名惡唑黃(Oxazole yellow)，簡稱YP1，是一種對正常動物細(xì)胞膜沒有通透性而對于凋亡與壞死細(xì)胞的細(xì)胞膜有通透性的DNA綠色熒光染料，常用于細(xì)胞凋亡與壞死的檢測。YO-PRO-1是一種非細(xì)胞膜穿透性的并對DNA具有高親和力的羰花青單體綠色熒光染料，在沒有與DNA結(jié)合的時候基本上沒有熒光，而與DNA結(jié)合后可以發(fā)出明亮的綠色熒光。在細(xì)胞凋亡發(fā)生時，細(xì)胞膜通透性發(fā)生改變，此時YO-PRO-1可以進入細(xì)胞內(nèi)與DNA結(jié)合，發(fā)出明亮的綠色熒光，因此YP1常和碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)配合用于分析和鑒定凋亡和壞死細(xì)胞，也可以直接使用YO-PRO-1/PI細(xì)胞凋亡與壞死檢測試劑盒(C1075)。
YP1/RNase細(xì)胞核染色液染色DNA后的最大激發(fā)光波長在491nm，最大發(fā)射光波長為509nm。由于YO-PRO-1熒光與其它熒光有很好的區(qū)分，所以非常適合用于多重?zé)晒饪贵w標(biāo)記時對細(xì)胞核進行染色。YP1/RNase細(xì)胞核染色液染色DNA后的激發(fā)光和發(fā)射光光譜參考圖1。
圖1. YO-PRO-1/RNase細(xì)胞核染色液染色DNA后的激發(fā)光和發(fā)射光光譜。
YP1/RNase細(xì)胞核染色液為即用型染色液，無須稀釋即可直接加入樣品中進行凋亡與壞死細(xì)胞或經(jīng)過通透處理的細(xì)胞的細(xì)胞核的染色，十分便捷。YP1/RNase細(xì)胞核染色液用于細(xì)胞核染色的效果參考圖2。RNase的存在可以充分消化細(xì)胞內(nèi)的RNA，使染色效果更佳。
圖2. YP1/RNase細(xì)胞核染色液對NRK-52E細(xì)胞的細(xì)胞核的染色效果。YP1/RNase細(xì)胞核染色液染色的NRK-52E細(xì)胞的細(xì)胞核呈綠色熒光(圖B)，Tubulin-Tracker Red (抗體法微管紅色熒光探針 C1050)染色的NRK-52E細(xì)胞的微管結(jié)構(gòu)見圖C，綠色熒光和紅色熒光的疊加(merge)的效果見圖D。注：NRK-52E細(xì)胞經(jīng)免疫染色固定液(P0098)固定后使用免疫染色強力通透液(P0097)通透。實驗檢測效果因?qū)嶒灄l件、檢測儀器等的不同而存在差異，圖中效果僅供參考。
本染色液的10ml和50ml包裝用于6孔板每孔檢測體系為500μl時分別可以檢測20次和100次；用于96孔板每孔檢測體系為100μl時可以分別可以檢測100次和500次。實際檢測次數(shù)會因為檢測體系的大小而有所不同。
包裝清單：
| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
| C2025-10ml | YO-PRO-1/RNase細(xì)胞核染色液 | 10ml |
| C2025-50ml | YO-PRO-1/RNase細(xì)胞核染色液 | 50ml |
| — | 說明書 | 1份 |
保存條件：
-20℃避光保存，至少一年有效。4℃避光保存，至少6個月有效。
注意事項：
熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。
實驗中所用到的免疫染色固定液(P0098)、免疫染色強力通透液(P0097)可以向訂購。
染色液中含有RNase酶，如果使用比較頻繁，可置于4℃保存，盡可能減少反復(fù)凍融。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用說明：
固定后細(xì)胞或切片的染色：
a.使用4%多聚甲醛固定液(P0099)或免疫染色固定液(P0098)對細(xì)胞進行固定，室溫固定10-15min。
b.吸除固定液，用PBS (C0221A)或免疫染色洗滌液(P0106)洗滌細(xì)胞2-3遍。
c.選做：使用免疫染色通透液(P0096)或配制在PBS中的0.1% Triton X-100 (ST795)進行通透，室溫5min。然后用PBS (C0221A)或免疫染色洗滌液(P0106)洗滌細(xì)胞2-3遍。如果用于染色凋亡或壞死細(xì)胞，則無需進行通透處理。
d.選做：按照免疫染色的方法進行抗體的孵育或用其它染料進行染色。
e.加入適當(dāng)體積的YP1/RNase細(xì)胞核染色液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞或樣品。
f.37℃避光孵育5-20min，以5min為初始孵育時間，后續(xù)可以根據(jù)實際染色效果對染色時間進行適當(dāng)調(diào)整和優(yōu)化，以得到更加理想的染色效果。
g.吸除YP1/RNase細(xì)胞核染色液，用PBS (C0221A)或免疫染色洗滌液(P0106)洗滌2-3次，隨后即可在熒光顯微鏡下觀察或其它熒光檢測系統(tǒng)檢測。如果之前未經(jīng)過通透處理，并且希望區(qū)分凋亡和壞死細(xì)胞，可以使用碘化丙啶(PI)進行復(fù)染，PI染色陽性的為壞死細(xì)胞，YP1染色陽性的為凋亡與壞死細(xì)胞。
