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阿爾新藍(lán)-核固紅染色試劑盒(pH1.0)

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 阿爾新藍(lán)-核固紅染色試劑盒(pH1.0) (Alcian Blue & Nuclear Fast Red Staining Kit, pH1.0)是一種通過阿爾新藍(lán)對含有硫酸根(sulfated)的組織如硫酸化黏液物質(zhì)或強(qiáng)硫酸化黏液物質(zhì)(strongly sulfated mucosubstances)等進(jìn)行染色的試劑盒,同時提供核固紅進(jìn)行復(fù)染。本產(chǎn)品對不同組織的石蠟切片和冰凍切片均適用,也可用于血涂片和骨髓涂片的染色。

本試劑盒染色時無須額外的酸化操作步驟,染色步驟更加簡單便捷。

阿爾新藍(lán)(Alcian Blue),也稱阿爾新藍(lán)8G、阿利新藍(lán)或愛先藍(lán),是一種類銅鈦花青共軛染料,最初用于紡織纖維染色。阿爾新藍(lán)的分子式為 C56H68N16S4Cl4Cu,分子量為1298.86,CAS號為33864-99-2,墨綠色結(jié)晶,有金屬光澤,溶于水。阿爾新藍(lán)屬于陽離子染料,中央含銅的酞菁環(huán)與四個異硫脲基通過硫醚鍵相連而成,異硫脲基呈中度堿性,使阿爾新藍(lán)帶陽離子。阿爾新藍(lán)使酸性物質(zhì)著色的機(jī)制尚不十分明確,一般認(rèn)為是陽離子的異硫脲基通過靜電與組織內(nèi)的多聚陰離子如酸性黏液物質(zhì)的羧基或硫酸根形成不溶性復(fù)合物,即染料分子中帶正電荷的鹽鍵和酸性黏液物質(zhì)中帶負(fù)電荷的酸性基團(tuán)結(jié)合呈藍(lán)色。

阿爾新藍(lán)是顯示酸性黏性物質(zhì)最特異的染料,所以阿爾新藍(lán)染色又可以稱為粘蛋白染色(mucin stain)。阿爾新藍(lán)染料與酸性黏液物質(zhì)中酸性基團(tuán)形成鹽鍵,利用染料的不同pH值,可區(qū)分酸性黏液物質(zhì)的類別:當(dāng)阿爾新藍(lán)染色液的pH值為1.0時,使含有硫酸根(sulfated)的組織如酸性硫酸化或強(qiáng)硫酸化黏液物質(zhì)染成藍(lán)色,而不能染色含有羧基的組織;當(dāng)阿爾新藍(lán)染色液的pH值為2.5時,也可以使結(jié)締組織或軟骨中含有羧基(carboxylated)的組織如唾液粘多糖蛋白(sialomucins)、透明質(zhì)酸(hyaluronic acid)及上皮酸性黏蛋白(epithelial acid mucin)等染為藍(lán)色,但對于含有硫酸根的組織,pH2.5的染色要弱于pH1.0;中性黏蛋白如胃黏膜和Brunner腺體部位的中性黏蛋白等不能與阿爾新藍(lán)反應(yīng)。核固紅染色液復(fù)染可使核染成粉紅色或紅色。阿爾新藍(lán)-核固紅染色試劑盒(pH1.0)染色后酸性黏性物質(zhì)和細(xì)胞核的顏色見下表:

Samples Color
硫酸化黏液物質(zhì)(Sulfated Mucosubstances) Blue
細(xì)胞核(Nuclei) Red
背景(Background) Pink

本試劑盒染色靈敏度高,背景低,著色清晰分明,用于小鼠小腸組織染色效果參考圖1。

圖1.阿爾新藍(lán)-核固紅染色試劑盒(pH1.0)用于小鼠小腸組織的染色效果圖。如圖所示,硫酸化黏液物質(zhì)被染成藍(lán)色,細(xì)胞核被染成紅色。Scale bar=100μm。實際染色效果會因樣品、檢測條件的不同而略有差異,本圖僅供參考。

本試劑盒C0153S和C0153M用于切片的染色,每個切片樣品各使用100μl染色液,可以分別進(jìn)行100次和500次染色。

包裝清單:

產(chǎn)品編號 產(chǎn)品名稱 包裝
C0153S-1 阿爾新藍(lán)染色液(pH1.0) 10ml
C0153S-2 核固紅染色液 10ml
說明書 1份

 

產(chǎn)品編號 產(chǎn)品名稱 包裝
C0153M-1 阿爾新藍(lán)染色液(pH1.0) 50ml
C0153M-2 核固紅染色液 50ml
說明書 1份

保存條件:

室溫避光保存,一年有效。長期不使用可以4℃或-20℃保存。

注意事項:

第一次使用本試劑盒時建議先取1-2個樣品進(jìn)行預(yù)實驗,摸索染色適宜的條件。

染色過程應(yīng)在濕盒中進(jìn)行,防止染液風(fēng)干。

核固紅復(fù)染的過程推薦淺染,通常能夠分辨細(xì)胞核即可,顏色過深有可能影響細(xì)胞觀察。

應(yīng)根據(jù)不同的組織類型選取pH1.0或pH2.5的阿爾新藍(lán)-核固紅染色試劑盒;對于不同的組織,染色時間也不完全相同。

本試劑盒中的阿爾新藍(lán)染色液已配制在酸性溶液中,無須再進(jìn)行額外的酸化處理。

如果阿爾新藍(lán)染色液出現(xiàn)沉淀,請勿使用。

誤放入冰箱等低溫條件下,核固紅染色液會出現(xiàn)析出物。此時可以25-50℃水浴加熱,充分溶解并混勻后使用。

本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。

為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

1.樣品處理:
a.對于石蠟切片。
石蠟切片的制備:按照常規(guī)方法進(jìn)行取材、固定、洗滌、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、烘片等步驟制備石蠟切片。
二甲苯中脫蠟5-10分鐘。
換用新鮮的二甲苯,再脫蠟5-10分鐘。
無水乙醇5分鐘。
90%乙醇2分鐘。
80%乙醇2分鐘。
70%乙醇2分鐘。
b.對于冰凍切片:
冰凍切片的制備:按照常規(guī)方法進(jìn)行取材、速凍、切片、烘片等步驟制備冰凍切片。
蒸餾水洗滌2分鐘。
c.對于血涂片、骨髓涂片:
晾干即可。
2.阿爾新藍(lán)染色液染色。
a.對于石蠟切片和冰凍切片:
(a)每個切片滴加50-100μl阿爾新藍(lán)染色液(pH1.0),置于濕盒中染色1小時,去除染液。蒸餾水洗滌3次,每次10秒。
(b)每個切片滴加50-100µl核固紅染色液,染色5-10分鐘,去除染液,自來水洗滌5分鐘。
(c)切片依次浸入70%乙醇10秒,80%乙醇10秒,90%乙醇10秒,無水乙醇10秒,然后使用二甲苯透明1分鐘,中性樹脂封片。
(d)在顯微鏡下觀察和拍照。
b.對于血涂片、骨髓涂片:
(a)每個切片滴加50-100μl阿爾新藍(lán)染色液(pH1.0),置于濕盒中染色1小時,去除染液。蒸餾水洗滌3次,每次10秒。
(b)每個切片滴加50-100µl核固紅染色液,染色5-10分鐘,去除染液,自來水洗滌5分鐘。
(c)晾干后在顯微鏡下觀察和拍照。
注:染色過深或過淺應(yīng)調(diào)整染色時間。

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