pRD29B-luc(植物報(bào)告基因質(zhì)粒)是自行研發(fā)的植物(如擬南芥等)原生質(zhì)體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染螢火蟲螢光素酶(firefly luciferase)報(bào)告基因質(zhì)粒。質(zhì)粒為氨芐青霉素抗性。
pRD29B-luc載體中Luciferase基因由RD29B誘導(dǎo)型啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)表達(dá)。RD29B為擬南芥在脫水，低溫或高鹽條件下誘導(dǎo)表達(dá)的基因，其編碼的親水性蛋白可以提高植物在以上逆境條件下的耐性。RD29B promoter是目前常用的逆境誘導(dǎo)型啟動(dòng)子，在脫落酸(Abscisic Acid，ABA)(ST1751)誘導(dǎo)的情況下，luciferase的表達(dá)水平可以大大增強(qiáng)。如果由花椰菜花葉病毒35S(CaMV35S)組成型強(qiáng)啟動(dòng)子啟動(dòng)GUS基因的表達(dá)，會(huì)增加植物的代謝負(fù)擔(dān)，造成大量物質(zhì)和能量的浪費(fèi)，并進(jìn)而影響植物正常的生長(zhǎng)發(fā)育；而RD29B promoter啟動(dòng)子不僅可以高效啟動(dòng)下游基因的表達(dá)，也可以比較好的規(guī)避CaMV35S的缺點(diǎn)。
pRD29B-luc中RD29B promoter的上下游有數(shù)個(gè)酶切位點(diǎn)，可利用其對(duì)RD29B promoter進(jìn)行其它啟動(dòng)子的替換，用以研究感興趣的啟動(dòng)子的功能。
pRD29B-luc載體僅保留植物瞬時(shí)轉(zhuǎn)化所需元件，結(jié)構(gòu)精簡(jiǎn)，避免由于載體過大導(dǎo)致原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化效率降低。此載體不可用于植物穩(wěn)定遺傳株系的構(gòu)建。
pRD29B-luc采用來自根瘤農(nóng)桿菌的胭脂堿合成酶基因終止子(nopaline synthase terminator，NOS-T)，用于終止RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄，對(duì)目的基因的表達(dá)進(jìn)行調(diào)控。
pRD29B-luc質(zhì)粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| Ampicillin resistance ORF | 137-997 |
| Ampicillin promoter | 998-1102 |
| M13 forward primer(M13 fwd) | 1576-1592 |
| RD29B promoter | 1646-2226 |
| Luciferase | 2229-3881 |
| NOS terminator | 4036-4288 |
| M13 reverse primer(M13 rev) | 4307-4323 |
| lac operator | 4331-4347 |
| lac promoter | 4355-4385 |
| CAP binding site | 4400-4421 |
| pUC origin | 4709-5297 |
pRD29B-luc質(zhì)粒(5479bp)的圖譜如下：
pRD29B-luc的詳細(xì)圖譜見說明書：https://www.beyotime.com/Manual/D2489 pRD29B-luc(植物報(bào)告基因質(zhì)粒).pdf
pRD29B-luc中沒有的酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that do not cut pRD29B-luc)包括：
| Acc65I | AccI | AfeI | AgeI | AleI | ApaI | AscI |
| AsiSI | AvrII | BaeI | BbvCI | BclI | BlpI | BmtI |
| Bpu10I | BsgI | BsmI | BstXI | BstZ17I | EagI | FseI |
| HpaI | KpnI | MluI | MscI | NaeI | NgoMIV | NheI |
| NotI | NruI | PaeR7I | PflFI | PflMI | PmeI | PmlI |
| PshAI | PspOMI | PspXI | RsrII | SacII | SalI | SexAI |
| SfiI | SmaI | SnaBI | SpeI | SrfI | StuI | SwaI |
| TspMI | Tth111I | XhoI | XmaI |
pRD29B-luc中的單酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that cut pRD29B-luc once)包括：
| AatII | G,ACGT`C | 1128 | DraIII | CAC,NNN`GTG | 1884 |
| AflII | A`CRYG,T | 4065 | EcoNI | CCTNN`N,NNAGG | 3846 |
| AhdI | GACNN,N`NNGTC | 211 | EcoRV | GAT|ATC | 3567 |
| AlwNI | CAG,NNN`CTG | 5061 | HincII | GTY|RAC | 3533 |
| AvaI | C`YCGR,G | 3285 | HindIII | A`AGCT,T | 1597 |
| BamHI | G`GATC,C | 1622 | NcoI | C`CATG,G | 2228 |
| BfuAI | ACCTGCNNNN`NNNN, | 3627 | NmeAIII | GCCGAG(N)19,NN` | 357 |
| BglII | A`GATC,T | 4285 | NsiI | A,TGCA`T | 4152 |
| BmgBI | CAC|GTC | 2030 | PacI | TTA,AT`TAA | 3551 |
| BsaBI | GATNN|NNATC | 4099 | PpuMI | RG`GWC,CY | 3408 |
| BsaI | GGTCTCN`NNNN, | 272 | PsiI | TTA|TAA | 2554 |
| BseRI | GAGGAG(N)8,NN` | 3782 | PstI | C,TGCA`G | 1613 |
| BsoBI | C`YCGR,G | 3285 | SbfI | CC,TGCA`GG | 1608 |
| BspMI | ACCTGCNNNN`NNNN, | 3627 | ScaI | AGT|ACT | 691 |
| BsrGI | T`GTAC,A | 2719 | SgrAI | CR`CCGG,YG | 3657 |
| BstAPI | GCAN,NNN`NTGC | 1379 | StyI | C`CWWG,G | 2227 |
| BstEII | G`GTNAC,C | 2837 | XcmI | CCANNNN,N`NNNNTGG | 2963 |
| Bsu36I | CC`TNA,GG | 2842 | XmnI | GAANN|NNTTC | 809 |
| BtgI | C`CRYG,G | 2227 | ZraI | GAC|GTC | 1130 |
| CspCI | ,NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN` | 1904 |
pRD29B-luc質(zhì)�？墒褂玫臏y(cè)序引物序列如下：
M13 forward primer(1576-1592): 5’-GTAAAACGACGGCCAGT-3’
luc promoter primer(2558-2274): 5’-GATAGAATGGCGCCGGG-3’
pRD29B-luc的全序列信息：D2489 pRD29B-luc.txt
包裝清單：
| 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
| D2489-1µg | pRD29B-luc | 1μg |
| D2489-100µg | pRD29B-luc | 100μg |
| — | 說明書 | 1份 |
保存條件：
-20℃保存。
注意事項(xiàng)：
本質(zhì)粒未經(jīng)書面許可不得用于任何商業(yè)用途，也不得移交給訂貨人所在實(shí)驗(yàn)室外的任何個(gè)人或單位。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用說明：
1.首次使用1µg包裝的本產(chǎn)品時(shí)，請(qǐng)先取少量本質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌，進(jìn)行質(zhì)粒小量、中量或大量抽提后再用于后續(xù)用途。抽提獲得的質(zhì)�？梢酝ㄟ^酶切電泳進(jìn)行鑒定，或通過測(cè)序進(jìn)行鑒定。
2.100µg包裝的本產(chǎn)品質(zhì)粒濃度為0.1µg/µl，共1ml。可以直接用于酶切，用于擬南芥原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化需進(jìn)行質(zhì)粒大量抽提。
