p35SPPDK-EGFP-Flag(植物用綠色熒光蛋白)是自行研發(fā)的植物(如擬南芥等)原生質(zhì)體表達(dá)質(zhì)粒，可以作為原生質(zhì)體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的陽性對(duì)照質(zhì)�；蛲ㄟ^構(gòu)建EGFP融合蛋白而實(shí)現(xiàn)觀察目的蛋白的亞細(xì)胞定位的目的。EGFP序列的N端有多個(gè)限制性酶切位點(diǎn)，根據(jù)閱讀框在此插入目的基因就可以表達(dá)C端含有EGFP標(biāo)簽的融合蛋白，利用EGFP的熒光特性可以比較容易地觀察融合蛋白的表達(dá)水平和細(xì)胞內(nèi)定位；EGFP序列的C端有2X Flag標(biāo)簽(DYKDDDDKDYKDDDDK)，可以在融合蛋白質(zhì)粒轉(zhuǎn)染原生質(zhì)體后實(shí)現(xiàn)Western Blot檢查融合蛋白表達(dá)水平的目的。質(zhì)粒為氨芐青霉素抗性。
p35SPPDK promoter-EGFP-Flag載體中EGFP基因由35SPPDK強(qiáng)啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)表達(dá)。35SPPDK強(qiáng)啟動(dòng)子由花椰菜花葉病毒35S(CaMV35S)啟動(dòng)子與玉米C4PPDK啟動(dòng)子融合而成，可以高效啟動(dòng)目的蛋白在植物細(xì)胞中的表達(dá)。
p35SPPDK-EGFP-Flag載體僅保植物留瞬時(shí)轉(zhuǎn)染所需元件，為避免由于載體過大導(dǎo)致原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率降低而采用精簡的載體結(jié)構(gòu)。此載體不可用于植物穩(wěn)定遺傳株系的構(gòu)建。
p35SPPDK-EGFP-Flag采用來自農(nóng)桿菌的胭脂堿合酶基因的終止子(nopaline synthase terminator，NOS-T)，用于終止RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄，對(duì)目的基因的表達(dá)進(jìn)行調(diào)控。
p35SPPDK-EGFP-Flag質(zhì)粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| M13 forward primer(M13 fwd) | 1-17 |
| 35SPPDK promoter | 84-593 |
| EGFP | 617-1333 |
| 2X Flag-tag | 1355-1402 |
| NOS terminator | 1411-1663 |
| M13 reverse primer(M13 rev) | 1702-1718 |
| lac operator | 1726-1742 |
| lac promoter | 1750-1780 |
| CAP binding site | 1795-1816 |
| pUC origin | 2104-2692 |
| Ampicililin resistance ORF | 2863-3723 |
| Ampicililin promoter | 3724-3828 |
p35SPPDK-EGFP-Flag質(zhì)粒(4301bp)的圖譜如下：
p35SPPDK-EGFP-Flag的詳細(xì)圖譜見說明書：https://www.beyotime.com/Manual/D2627 p35SPPDK-EGFP-Flag(植物用綠色熒光蛋白).pdf
p35SPPDK-EGFP-Flag中沒有的酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that do not cut p35SPPDK-EGFP-Flag包括：
| AccI | AfeI | AgeI | AscI | AsiSI | AvrII | BbvCI |
| BclI | BfuAI | BglII | BlpI | BmtI | BsiWI | BspDI |
| BspMI | BstBI | BstEII | BstXI | BstZ17I | Bsu36I | ClaI |
| DraIII | EagI | EcoNI | FseI | HincII | HpaI | MfeI |
| MluI | MscI | NaeI | NgoMIV | NheI | NotI | NruI |
| PacI | PflFI | PflMI | PmeI | PmlI | PpuMI | PsiI |
| PspXI | RsrII | SacII | SalI | SbfI | SexAI | SfiI |
| SgrAI | SmaI | SnaBI | SphI | SrfI | SwaI | TspMI |
| Tth111I | XcmI | XmaI |
p35SPPDK-EGFP-Flag中的單酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that cut p35SPPDK-EGFP- Flag once)包括：
| AatII | G,ACGT`C | 3858 | EcoRV | GAT|ATC | 337 |
| Acc65I | G`GTAC,C | 611 | KasI | G`GCGC,C | 4158 |
| AflII | A`CRYG,T | 1440 | KpnI | G,GTAC`C | 616 |
| AhdI | GACNN,N`NNGTC | 2936 | NarI | GG`CG,CC | 4159 |
| AlwNI | CAG,NNN`CTG | 2459 | NcoI | C`CATG,G | 616 |
| ApaI | G,GGCC`C | 396 | NdeI | CA`TA,TG | 4108 |
| ApoI | R`AATT,Y | 1687 | NsiI | A,TGCA`T | 1531 |
| AvaI | C`YCGR,G | 26 | PaeR7I | C`TCGA,G | 26 |
| BaeI | ,(N)5`(N)1ACNNNNGTAYC(N)7,(N)5` | 598 | PluTI | G,GCGC`C | 4162 |
| BamHI | G`GATC,C | 597 | PshAI | GACNN|NNGTC | 245 |
| BmgBI | CAC|GTC | 308 | PspOMI | G`GGCC,C | 392 |
| BsaAI | YAC|GTR | 556 | PstI | C,TGCA`G | 1411 |
| BsaBI | GATNN|NNATC | 1474 | SacI | G,AGCT`C | 523 |
| BsaI | GGTCTCN`NNNN, | 2997 | SapI | GCTCTTCN`NNN, | 1927 |
| BsmI | G`AATG,CN` | 437 | ScaI | AGT|ACT | 3417 |
| BsoBI | C`YCGR,G | 26 | SfoI | GGC|GCC | 4160 |
| BspEI | T`CCGG,A | 527 | SpeI | A`CTAG,T | 1335 |
| BspQI | GCTCTTCN`NNN, | 1927 | SspI | AAT|ATT | 3740 |
| BsrGI | T`GTAC,A | 1326 | StuI | AGG|CCT | 1349 |
| BstAPI | GCAN,NNN`NTGC | 4105 | StyI | C`CWWG,G | 615 |
| CspCI | NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN` | 300 | XbaI | T`CTAG,A | 603 |
| Eco53kI | GAG|CTC | 525 | XhoI | C`TCGA,G | 27 |
| EcoO109I | RG`GNC,CY | 3912 | ZraI | GAC|GTC | 3856 |
| EcoRI | G`AATT,C | 1688 |
p35SPPDK-EGFP-Flag質(zhì)粒可使用的測(cè)序引物序列如下：
35SPPDK forward primer(473-494): 5’-CCTTTTCGCTGTACTCTCTCGC-3’
EGFP reverse primer(670-689): 5’-CGTTTACGTCGCCGTCCAG-3’
p35SPPDK-EGFP-Flag的全序列信息：D2627 p35SPPDK-EGFP-Flag.txt
包裝清單：
| 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
| D2627-1µg | p35SPPDK-EGFP-Flag | 1μg |
| D2627-100µg | p35SPPDK-EGFP-Flag | 100μg |
| — | 說明書 | 1份 |
保存條件：
-20℃保存。
注意事項(xiàng)：
本質(zhì)粒未經(jīng)書面許可不得用于任何商業(yè)用途，也不得移交給訂貨人所在實(shí)驗(yàn)室外的任何個(gè)人或單位。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用說明：
1.首次使用1 µg包裝的本產(chǎn)品時(shí)，請(qǐng)先取少量本質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌，進(jìn)行質(zhì)粒小量、中量或大量抽提后再用于后續(xù)用途。抽提獲得的質(zhì)�？梢酝ㄟ^酶切電泳進(jìn)行鑒定，或通過測(cè)序進(jìn)行鑒定。
2.100 µg包裝的本產(chǎn)品質(zhì)粒濃度為0.1 µg/µl，共1ml�？梢灾苯佑糜诿盖�。用于植物原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化需進(jìn)行質(zhì)粒大量抽提。
