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重組腸激酶

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名稱(Name) 重組腸激酶;Recombinant Enterokinase
別名(Synonyms) 重組腸激酶輕鏈; Enterokinase, light chain; Enteropeptidase; Enterokinase; Serine protease 7; ENTK; MGC133046; PRSS7; TMPRSS15; protease, serine, 7 (enterokinase); PRSS7enteropeptidase; Serine protease 7; Transmembrane protease serine 15; transmembrane protease, serine 15
產(chǎn)品簡介(Background) 腸激酶是一種高度特異性絲氨酸蛋白酶,天然腸激酶由1條結(jié)構(gòu)亞基(重鏈)和1條催化弧基 (輕鏈)構(gòu)成, 兩者通過1個分子間二硫鍵結(jié)合, 結(jié)構(gòu)亞基負責將催化亞基固定在小腸刷狀緣膜上并引導它向腸腔移動, 催化亞基可以特異性識別Asp-Asp-Asp-Asp-Lys序列并沿序列的羧基端切下, 將胰蛋白酶原活化為胰蛋白酶, 從而啟動各種酶原活化的級聯(lián)。重組牛腸激酶是一種高純度的重組牛腸激酶輕鏈片段,該酶經(jīng)HPLC純化,純度高,特異性高,不含其它蛋白酶,用于去除N-末端和Met-N-末端融合蛋白中的FLAG多肽(DDDDK, 并且K后面不是脯氨酸),但不移除C端FLAG。腸激酶具有較寬pH范圍(4.5-9.5)和較寬溫度范圍。
產(chǎn)品用途(Applications) 從N-末端和Met-N-末端融合蛋白中去除標記肽;
蛋白質(zhì)修飾和氨基酸序列測定。
外觀(Physical appearance) 澄清、無色至淡黃色液體
活性(Biological activity) ≥ 5.0U/µl,一般為10U/µl,約為20,000U/mg pro,具體參考每批次標簽或COA。
活力單位(Unit definition) 1U定義為在25℃,12h~16h之內(nèi),將0.5mg保存于25mM Tris-HCl (pH8.0)緩沖液中的融合蛋白切割95%所需的酶量。
純度(Purity) 單一主條帶
蛋白含量(Protein content) -
配方(Formulation) Bovine EK is supplied in 50mM Tris-HCl, pH 8.0, 0.5M NaCl and 50% glycerol.
使用方法(Recommended usage) 1) 25℃酶切(按照酶活性定義舉例):
25mM Tris-HCl (pH8.0)體系中含F(xiàn)lag融合蛋白0.1-1mg/ml (蛋白總量50-100µg),重組EK 0.1-0.2U。25℃酶切過夜或16-24h,在NC膜上用Dot blot的方法并用Flag抗體檢測酶切效果, 或使用SDS-PAGE進行酶切效果檢測。注:不建議37℃條件下酶切,可能會有非特異性酶切出現(xiàn)。
2) 4℃低溫酶切條件:
4℃條件下也可對底物進行有效酶切,但需要將酶切時間延長至48-64h,或增加2-3倍酶量。
3) 酶切優(yōu)化和放大優(yōu)化:
 優(yōu)化:可以對酶切條件進行優(yōu)化,例如緩沖液pH、融合蛋白濃度、EK的量以及酶切時間,使融合蛋白能在穩(wěn)定條件下被酶切,用SDS-PAGE檢測酶切效果。
 放大:選擇優(yōu)化后的反應條件,按該條件等比例放大,用SDS-PAGE檢測酶切效果。
4) 去除重組腸激酶的方法:
 如果使用親和層析,可以利用胰蛋白酶抑制劑親和膠,由于腸激酶是一種絲氨酸蛋白酶,胰蛋白酶抑制劑可以與腸激酶結(jié)合,從而達到純化目的。建議利用離子交換層析分離去除微量的腸激酶。
 pH8.0,腸激酶與DEAE膠結(jié)合,并且在0.15M NaCl中可以被洗脫。可以利用目的蛋白與腸激酶電荷以及與DEAE膠的結(jié)合以及洗脫的不同條件將二者進行分離。
5) 在咪唑<100mM,或NaCl<50mM,或甘油< 5%進行酶切,酶的用量與蛋白的比例不變。在>200mM咪唑,或>200mM NaCl,或>5%甘油的條件下,酶切效果會受影響?蓞⒄找韵峦扑]方法進行酶切:
a.為獲得理想酶切結(jié)果,請將樣品透析至25mM Tris-HCl (pH8.0)緩沖液中,再進行酶切。
b.若不便透析,可將樣品稀釋,咪唑含量在100mM以下,NaCl濃度在50mM以下,甘油濃度小于5%以下進行酶切,酶的用量與蛋白的比例不變(即1U酶切500μg蛋白)。
c.如果樣品溶液中含有上述成分中的一種或多種,且不便去除,此時適當增加酶量或延長酶切時間,也可達到較好酶切效果。
穩(wěn)定性(Stability) -20℃,24個月穩(wěn)定;25℃,一周內(nèi),無活性損失。緩沖體系:50mM Tris-HCl,pH8.0,250mM NaCl,2mM Ca2+,50%甘油。
酶液反復凍融穩(wěn)定性:反復凍融5次,無活性損失。
氨基酸序列(Amino acid sequence) IVGGSDSRE GAWPWVVALY FDDQQVCGAS LVSRDWLVSA AHCVYGRNME PSKWKAVLGL HMASNLTSPQ IETRLIDQIV INPHYNKRRK NNDIAMMHLE MKVNYTDYIQ PICLPEENQV FPPGRICSIA GWGALIYQGS TADVLQEADV PLLSNEKCQQ QMPEYNITEN MVCAGYEAGG VDSCQGDSGG PLMCQENNRW LLAGVTSFGY QCALPNRPGV YARVPRFTEW IQSFLH
備注:本氨基酸序列僅供參考,實際氨基酸長度或序列可能有一定變化。
產(chǎn)品優(yōu)勢(Advantage) 無動物源性:重組生產(chǎn),無外源性的病毒污染,生產(chǎn)過程不使用任何動物源原料。
質(zhì)量穩(wěn)定:批量生產(chǎn),可保證穩(wěn)定連續(xù)的批次生產(chǎn);產(chǎn)品批次間無差異,質(zhì)量穩(wěn)定。
純度高:比活高;宿主蛋白殘留小于生物制品限度要求。
凍干粉:易于儲存和運輸。
符合法規(guī)要求:生產(chǎn)設備和生產(chǎn)環(huán)境符合相關法規(guī)要求,生產(chǎn)過程完全遵循NSF ISO 9001:2015質(zhì)量體系并符合GMP指導原則。

包裝清單:

產(chǎn)品編號 產(chǎn)品名稱 包裝
P4237-100U 重組腸激酶 100U
P4237-500U 重組腸激酶 500U
P4237-1000U 重組腸激酶 1000U
說明書 1份

保存條件:

-20℃保存,兩年有效。

注意事項:

本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。

為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用說明:
1.收到產(chǎn)品后請立即按照說明書推薦的條件保存。除非特別注明,相關產(chǎn)品均為凍干粉,由于微量的蛋白在凍干過程中沉積在管內(nèi),形成很薄或不可見的蛋白層,所以在打開管蓋前,我們建議在離心機中約8,000-12,000g離心10-30秒,使附著在管蓋或管壁上的蛋白聚集于管底。
2.大多數(shù)細胞因子或重組蛋白的凍干粉是非常容易溶解的,一般用移液槍的槍頭輕吹幾下或者輕輕搖晃瓶子,即可使細胞因子或重組蛋白完全溶解。請勿用vortex劇烈振蕩,以免蛋白變性而失活。
3.具體的最佳工作濃度請自行參考相關文獻,或者根據(jù)實驗目的,以及特定細胞和動物,通過實驗進行摸索和優(yōu)化。

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