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RNase Inhibitor

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 RNase Inhibitor (Ribonuclease Inhibitor),即RNases抑制劑,是一種大腸桿菌重組表達的人胎盤核糖核酸酶抑制劑

(human placental RNase inhibitor),可以通過非競爭性方式按1:1比例和RNase A、RNase B、RNase C和人胎盤核糖核酸酶(human placental RNase)結合,并抑制這些酶的活性,從而保護RNA不被這些酶降解。
RNase Inhibitor對RNase A、RNase B、RNase C和人胎盤核糖核酸酶的抑制能力極強,其Ki值低至約為4×10-14M。通常抗體和抗原的親和常數僅為10-6-10-9M。并且RNase Inhibitor和這些RNA酶的結合是非?焖俚,幾乎在加入的瞬間就會和這
些RNA酶形成復合物從而抑制其酶活性。
RNase Inhibitor不能抑制RNase I、T1、T2、H、U1、U2、CL3、RNase from Aspergillus、S1 Nuclease、Taq DNA
polymerase、M-MLV reverse transcriptase和SP6、T7、T3 RNA polymerase的的酶活性。
RNase Inhibitor在pH 5-8范圍內保持其RNA酶抑制活性,在pH 7-8時抑制活性最高。RNase Inhibitor維持其活力需要至少在溶液中含有1mM DTT。
本產品與Thermo公司的RiboLock RNase Inhibitor以及Promega公司的RNasin Ribonuclease Inhibitor屬于同類產品,都是重組表達的人胎盤核糖核酸酶抑制劑,對于RNase的抑制效果也完全相同(參考圖1和圖2)。

圖1. RNase Inhibitor和同類產品(Competitor RNase Inhibitor)對RNase A酶活性的抑制效果比較。5μg yeast RNA與0或2ng RNase A及8、4、2、1或0U RNase Inhibitor,在100μl的反應體系(50mM MOPS, 5mM MgCl2, pH6.5)中,37孵育15分鐘。反應完畢后立即取20μl反應液用1%瓊脂糖凝膠進行電泳分析。

圖2. RNase Inhibitor和同類產品(Competitor RNase Inhibitor)對RNase A的酶活性的抑制效果比較。2μg Hela細胞總RNA與0或0.5ng RNase A及20、10、5、2.5、1.25、0.625或0U RNase Inhibitor,在20μl的反應體系(50mM MOPS, 5mM MgCl2, pH6.5)中,37℃孵育15分鐘。反應完畢后立即全部用1%瓊脂糖凝膠進行電泳分析。

用途:用于cDNA合成,體外轉錄,體外翻譯,以及mRNA-protein復合物分離純化等過程中保護RNA不被降解;還可用于特定RNase活性的鑒定等。
來源:由大腸桿菌表達,表達基因的來源為human placenta中編碼該酶的基因。
分子量:約49.6 kDa(單體)。
活性定義:將能夠抑制5ng RNase A的50%活性的酶量定義為一個活性單位。
活性檢測條件:100mM Tris-HCl (pH7.5), 1.2mM EDTA, 0.1mg/ml BSA, 100ng/ml RNase A, 0.1mg/ml E.coli [3H]-
RNA, 50mg/ml yeast RNA, 8mM DTT。
純度:不含DNA內切酶和外切酶,不含RNA酶。
儲存溶液:20mM HEPES-NaOH (pH7.5), 50 mM NaCl, 8 mM DTT, 50% (v/v) glycerol。
失活或抑制:75℃加熱10分鐘可以導致完全失活。70℃加熱10分鐘仍會有微量活性殘留。SDS和尿素等導致蛋白變性的試劑
以及對氯汞基苯甲酸鹽(p-chloromercuribenzoate)、重鉻酸鉀等氧化劑會抑制RNase Inhibitor與RNA酶的結合。
包裝清單:

產品編號 產品名稱 包裝
R0102-2KU RNase Inhibitor (40U/μl) 2000U
R0102-10KU RNase Inhibitor (40U/μl) 10000U
R0102-50KU RNase Inhibitor (40U/μl) 50000U
說明書 1份

保存條件:
-20℃保存。
注意事項:
使用時宜存放在冰盒內或冰浴上,使用完畢后宜立即放置于-20℃保存。
酶儲存溶液中加入DTT可保證RNase Inhibitor長期貯存的穩(wěn)定性。
本產品僅限于專業(yè)人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用說明:
1. 對于cDNA合成、體外轉錄、體外翻譯等常見的反應體系中,為保護其中的RNA不被RNase降解,RNase Inhibitor推薦用量為最終濃度1-2U/μl。

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